精原细胞介导法制备转基因绵羊以及后代肉品质测定

发布时间：2017-08-11 13:11

  本文关键词：精原细胞介导法制备转基因绵羊以及后代肉品质测定

  更多相关文章： 羊 成肌调节因子 MyoG 精原细胞介导法 屠宰性能 肉品质

【摘要】：骨骼肌是目前肉羊育种中的重要经济性状,成肌调节因子(Myogenic regulatory factors, MRFs)负责调控整个骨骼肌的发生过程,MyoG是MRFs家族中唯一在所有骨骼肌细胞中均有表达的基因,在中胚层成肌细胞迁移至靶组织及完成增殖后肌管的形成过程中起调控作用,其成肌分化作用是其它MRFs家族成员无法代替的。本研究通过精原细胞介导法制备MyoG绵羊并对转基因后代进行肉质分析,旨在验证该方法制备转基因绵羊的可行性,同时也为生产实践提供参考依据,为社会带来一定的经济效益。首先,通过精原细胞介导法,将携带有MyoG的重组载体转入3只第一批成年公羊睾丸内,单侧注射。注射40天后,摘取公羊睾丸,从附睾中采集精液,通过对绵羊精液涂片检查、睾丸切片观察、精子基因组DNA经PCR检测、精子总蛋白经Western blot检测,发现基因转染效率可达到30%,初步验证通过精原细胞介导法可以高效的将外源基因MyoG转进绵羊精子中。基于上述成熟的方法体系,再次注射3只公羊,然后分别将公羊放入三个母羊圈中,每个圈大约10头母羊,进行自然交配,获得48头G1代羔羊,经过DNA和蛋白水平检测,最终获得1头转基因个体,阳性率为2.08%,将后代进行屠宰,对后代的屠宰性能、肉品质以及肌肉纤维数等指标进行测定,发现MyoG过表达绵羊的肌纤维数高于对照组,而且屠宰性能跟阴性个体相比也有所提高,通过对肌肉的肉色、pH值、剪切力、蒸煮损失等指标进行测定,发现MyoG过表达绵羊的肉品质与阴性个体相比也有所改善。
【关键词】：羊 成肌调节因子 MyoG 精原细胞介导法 屠宰性能 肉品质
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S826
【目录】：

• 中文摘要2-3
• Abstract3-7
• 符号表(缩略表语)7-9
• 第一章 文章综述9-16
• 1. 我国羊肉市场现状9
• 2. 生肌调节因子MRFs家族9-10
• 3. MyoG基因研究进展10-13
• 3.1 MyoG基因介绍10
• 3.2 MyoG基因的结构10
• 3.3 MyoG基因的生物学功能10-11
• 3.4 MyoG基因的表达11-12
• 3.5 MyoG表达的调节12
• 3.6 MyoG基因与生产性能的关系12-13
• 4. 动物转基因技术与转基因羊13-14
• 4.1 反转录病毒法13
• 4.2 原核显微注射法13-14
• 4.3 胚胎干细胞介导法14
• 4.4 精原细胞介导法14
• 5. 睾丸注射制备转基因羊14-15
• 6. 转基因羊生产性能检测15
• 7. 本研究的目的和意义15-16
• 第二章 MyoG转基因绵羊的制备及后代肉品质测定16-32
• 1. 材料与方法17-22
• 1.1. 材料17
• 1.2. 方法与步骤17-22
• 2. 结果22-28
• 2.1 睾丸组织冰冻切片和精子荧光检测22-24
• 2.1.1 涂片检查MyoG基因在精液中的荧光表达情况22-23
• 2.1.2 睾丸精液DNA水平检测23-24
• 2.2 睾丸组织冰冻切片观察目的基因荧光表达24
• 2.3 睾丸精液蛋白水平检测24-25
• 2.4 利用精原细胞介导法制备MyoG绵羊25
• 2.5 G1代羔羊血样DNA水平检测25-26
• 2.6 G1代羔羊耳样组织蛋白检测26
• 2.7 转基因后代羊的屠宰率及肉品质测定26-28
• 3. 讨论28-31
• 4 结论31-32
• 参考文献32-38
• 致谢38-39

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本文编号：656285