湖北山羊蓝舌病血清学调查及病原分离与鉴定

发布时间：2017-08-21 18:32

  本文关键词：湖北山羊蓝舌病血清学调查及病原分离与鉴定

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【摘要】：[目的]通过对湖北省山羊蓝舌病的血清学调查和病原的分离与鉴定,了解了蓝舌病在当地的流行情况,为蓝舌病的预防提供依据。[方法]采用竞争性酶联免疫吸附实验(C-ELISA),对湖北省郧西、襄阳、兴山、夷陵、荆州、麻城、江夏7个市(县、区)506份山羊血清进行了蓝舌病抗体检测。选择其阳性率与平均阳性率相近的兴山建立蓝舌病易感动物监测点,对抗体检测呈阳性的山羊血液样品进行鸡胚静脉接种增毒和BHK-21细胞分离病毒,通过VP3 BTV核酸检测、酶切鉴定、序列分析等进行鉴定。[结果]血清学调查检测出蓝舌病抗体阳性血清130份,平均阳性率为25.69%,其中郧西阳性率最高,为38.33%；荆州阳性率最低,为4%。2015年4月到11月份,监测点血清检测有一只山羊的蓝舌病抗体呈阳性,其阳性率一直呈现上升趋势,最后趋于稳定,且8月份的抗体阳性率最高。从转阳前血液样品中分离获得一株病毒,通过VP3基因对比鉴定,证实分离病毒为BTV,并命名为HB201508,与DQ186828相似性最高,为94.9%,与毒株JN255914相似性最低,为80.2%。[结论]湖北境内山羊普遍存在BTV的感染,且不同地区动物的阳性率的分布存在差异；从监测点的山羊血液中分离到1株蓝舌病病毒,为湖北省蓝舌病防控提供了重要的参考依据。
【关键词】：蓝舌病 血清学监测 病原分离 病毒鉴定
【学位授予单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.27
【目录】：

• 摘要8-9
• 前言9-16
• 1 蓝舌病流行状况9-10
• 1.1 国外流行状况9-10
• 1.2 国内流行状况10
• 2 流行病学10-11
• 3 BTV病原学11-13
• 3.1 BTV的结构11
• 3.2 BTV结构蛋白11-12
• 3.2.1 外壳蛋白VP2和VP511
• 3.2.2 内衣壳蛋白VP3和VP711-12
• 3.2.3 微量蛋白VP1、VP4和VP612
• 3.3 非结构蛋白12-13
• 3.4 病毒特性13
• 4 发病机理与免疫应答13
• 5 临床症状和病理变化13-14
• 6 诊断14-15
• 6.1 临床诊断14
• 6.2 实验室诊断14-15
• 6.2.1 分子生物学检测14
• 6.2.2 血清学检测方法14-15
• 7 防控措施15
• 8 研究目的与意义15-16
• 材料与方法16-30
• 1 材料16-18
• 1.1 试验样品、鸡胚与细胞16
• 1.2 主要设备和仪器16-17
• 1.3 试验主要试剂17
• 1.3.1 C-ELISA主要试剂17
• 1.3.2 细胞培养相关试剂17
• 1.3.3 核酸电泳相关试剂17
• 1.3.4 病毒核酸鉴定相关试剂17
• 1.4 主要试剂的配制17-18
• 1.5 引物的合成18
• 2 方法18-30
• 2.1 湖北省山羊BTV清流行病学调查18-21
• 2.1.1 样品及信息的采集18-19
• 2.1.2 样品处理19-20
• 2.1.3 相关性分析方法20-21
• 2.2 监控点的设立与监测21
• 2.2.1 监控点的选择21
• 2.2.2 监控动物群设置21
• 2.2.3 样品采集21
• 2.2.4 抗体监测方法21
• 2.3 病毒分离21-24
• 2.3.1 接种样品的处理21
• 2.3.2 鸡胚的准备21-22
• 2.3.3 鸡胚接种22
• 2.3.4 鸡胚收获22-23
• 2.3.5 细胞接种23-24
• 2.3.6 病毒分离物保存24
• 2.4 病毒鉴定24-30
• 2.4.1 细胞分离物RNA提取24-25
• 2.4.2 PCR扩增25-26
• 2.4.3 PCR产物胶回收26-27
• 2.4.4 载体连接27
• 2.4.5 感受态细胞DH5α的制备(CaCl2法)27
• 2.4.6 DH5α感受态细胞的转化27-28
• 2.4.7 质粒的提取28
• 2.4.8 酶切鉴定28
• 2.4.9 序列分析28-30
• 试验结果30-38
• 1 湖北省山羊BTV血清学检测结果30-32
• 1.1 BTV抗体检测结果30
• 1.2 相关性分析结果30-32
• 1.2.1 地理位置与血清阳性率相关性分析30
• 1.2.2 气候与血清阳性率相关性分析30-32
• 2 监控动物抗体检测结果32-33
• 3 病毒分离结果33-35
• 3.1 鸡胚接毒结果33-34
• 3.2 细胞接毒结果34-35
• 4 病毒鉴定结果35-38
• 4.1 PCR扩增35
• 4.2 酶切鉴定35-36
• 4.3 基因序列分析36-37
• 4.4 基因进化分析37-38
• 讨论38-40
• 结论40-42
• 参考文献42-46
• Abstract46-48
• 致谢48

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本文编号：714457