牛支原体武威株脂蛋白P48基因的克

发布时间：2017-09-05 02:09

  本文关键词：牛支原体武威株脂蛋白P48基因的克隆、原核表达及亚细胞定位

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【摘要】：【目的】验证牛支原体P48蛋白在细胞中的位置,并为后续功能的研究奠定基础.【方法】运用Overlap PCR扩增获得点突变后的牛支原体武威分离株P48基因,并将其克隆至pGEM-T Easy,将测序正确的质粒克隆至表达载体pET-28a中,构建原核表达质粒pET-P48,表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),并在IPTG诱导下成功获得融合蛋白表达产物rMbP48,大小约为51ku.重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.在分离牛支原体膜蛋白的基础上应用Western-blot及间接ELISA对P48蛋白在细胞中的分布进行分析.【结果】P48蛋白主要存在于牛支原体的膜分离相.全菌免疫荧光试验进一步证实脂蛋白P48位于牛支原体的膜表面.【结论】牛支原体P48蛋白是存在于牛支原体表面的一种具有免疫原性的脂蛋白.本研究为进一步研究P48蛋白的生物学特性及建立高效的牛支原体诊断方法奠定了基础.
【作者单位】： 甘肃农业大学动物医学院;
【关键词】： 牛支原体 P 基因克隆 原核表达 亚细胞定位
【基金】：甘肃省自然科学基金项目“新生犊牛传染性肺炎病原的分离、鉴定及快速诊断方法研究”(1308RTZA235)
【分类号】：S852.62
【正文快照】： 牛支原体(Mycoplasma bovis,Mb)是牛呼吸道疾病的重要病原体之一,于1961年被Hale等[1]从美国乳房炎病牛中首次分离,并于1976年证实其与牛呼吸系统疾病有关.现已证实,牛支原体不仅可引起牛的肺炎、耳炎、流产、关节炎、奶牛乳房炎和生殖道炎症等疾病,而且可与多杀性巴氏杆菌、，

本文编号：795188