醌类化合物1,2-NQ和PQ诱导肺组织损伤作用的研究

发布时间：2017-09-30 18:07

  本文关键词：醌类化合物1,2-NQ和PQ诱导肺组织损伤作用的研究

  更多相关文章： 1 2-萘醌 9 10-菲醌 损伤 肺上皮细胞 巨噬细胞

【摘要】：在城市中,柴油机排放颗粒物(DEP)是大气污染的重要组成成分,1,2-NQ和PQ是存在于DEP中的主要醌类化合物,能导致多种呼吸道疾病的加重、恶化。然而,它们对肺组织损伤的作用尚不清楚。本次实验通过气管内灌注1,2-NQ和PQ,研究1,2-NQ和PQ对肺组织病理组织学及相关血液学变化的影响。通过检测细胞凋亡和坏死,研究1,2-NQ和PQ对细胞损伤的影响。采用qt-PCR的方法,研究1,2-NQ和PQ对炎症细胞因子相对表达量的影响。试验一：选用4-6周龄20g左右的雄性ICR小鼠用于实验,A549细胞和dU937细胞用于体外实验。将动物随机分成三个组,异氟烷麻醉,实验组分别将1,2-NQ和PQ灌注到小鼠的气管内,对照组使用PBS溶液,各组在24h、48h和72h取三只小鼠采集血液和肺脏组织样本,检测相关血液学变化,肺组织病理学观察肺损伤。试验二：A549细胞和dU937细胞分别接种于24孔板内,用1,2-NQ和PQ染毒处理,随后检测细胞凋亡和坏死。试验三：A549细胞和U937细胞分别接种于6孔板内,然后用10ng/mL的LPS预处理3h后,1,2-NQ和PQ染毒处理,收集细胞样品提取RNA,荧光定量PCR方法检测TNF-α、IL-1β和MIP-1α基因的相对表达量。结果如下：1.肺组织病理学检测显示：对照组小鼠肺组织结构完整,未见肺组织损伤。与对照组相比,1,2-NQ组可见肺间质内毛细血管扩张充血,伴有炎性细胞浸润,部分肺泡壁肿胀。PQ组小鼠肺间质内血管充血,炎性细胞聚集,肺泡壁明显增厚,部分肺泡壁破裂,肺泡相互融合。血液学检测结果显示：与对照组相比,1,2-NQ组白细胞数量显著升高(P0.05),淋巴细胞数量显著升高(P0.05),嗜中性粒细胞数量显著升高(P0.05)；与对照组相比,PQ组血液学检测结果无显著性变化(P0.05)。2.1,2-NQ染毒处理A549细胞,细胞坏死率呈时间-剂量依赖性显著升高(P0.01),细胞凋亡率显著升高(P0.05或P0.01)。PQ染毒处理A549细胞,细胞坏死率呈时间-剂量依赖性显著升高(P0.01),细胞凋亡率在24h显著升高(P0.01)。1,2-NQ染毒处理dU937细胞,与对照组相比,细胞凋亡率和细胞坏死率均呈时间-剂量依赖性升高(P0.05或P0.01)。PQ染毒处理dU937细胞,与对照组相比,细胞凋亡率和坏死率均呈时间-剂量依赖性显著升高(P0.05或P0.01)。3.1,2-NQ染毒处理A549细胞,与对照组相比,TNF-α、IL-1β和MIP-1α的基因相对表达量均未见显著性变化(P0.05),在LPS预处理后,TNF-α和IL-1p的基因相对表达量呈剂量依赖性升高(P0.01)。PQ染毒处理A549细胞,与对照组相比,TNF-α、IL-1β和MIP-1α的基因相对表达量均未见显著性变化(P0.05),在LPS预处理后,TNF-a、IL-1β和MIP-1α的基因相对表达量均显著升高(P0.01)。1,2-NQ染毒处理dU937细胞,与对照组相比,IL-1p和MIP-1α的基因相对表达量均显著降低(P0.05或P0.01),在LPS预处理后,IL-1p和MIP-1α的基因相对表达量呈剂量依赖性降低(P0.05或P0.01)。PQ染毒处理dU937细胞,与对照组相比,TNF-α、IL-1β和MIP-1α的基因相对表达量均未见显著性变化(P0.05),在LPS预处理后,低剂量PQ诱导TNF-α、IL-1β和MIP-1α的基因相对表达量显著升高(P0.01),而随着PQ浓度的增加,TNF-α、IL-1β和MIP-1α的基因相对表达量呈剂量依赖性降低。结论：1,2-NQ和PQ能导致肺组织损伤,诱导细胞发生凋亡和坏死,调节炎症细胞因子的合成和释放,加重肺组织损伤。
【关键词】：1 2-萘醌 9 10-菲醌 损伤 肺上皮细胞 巨噬细胞
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.3
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-11
• 符号说明11-12
• 第一部分 文献综述12-29
• 第一章 大气中的醌类化合物12-15
• 1 醌类化合物的形成12-13
• 1.1 醌类化合物的来源12-13
• 1.2 醌类化合物的含量13
• 2 醌类化合物的结构及性质13-15
• 2.1 醌类化合物的化学结构13-14
• 2.2 醌类化合物的理化性质14-15
• 第二章 醌类化合物的生物学作用研究15-23
• 1 醌类化合物的电子转移作用15
• 2 醌类化合物的生理毒性作用15-17
• 2.1 醌类化合物的生理毒性15-16
• 2.2 氧化性损伤16-17
• 3 醌类化合物的致病性研究17-19
• 3.1 DEP的致病性17-18
• 3.2 NQ的致病性18
• 3.3 PQ的致病性18-19
• 4 醌类化合物对细胞死亡影响的研究19-21
• 4.1 细胞死亡19
• 4.2 肺上皮细胞19-20
• 4.3 巨噬细胞20-21
• 4.4 醌类化合物对细胞死亡影响的研究21
• 5 醌类化合物对炎症细胞因子表达影响的研究21-23
• 5.1 炎症细胞因子21-22
• 5.2 醌类化合物对炎性细胞因子表达的影响22-23
• 参考文献23-29
• 第二部分 实验研究29-74
• 试验一 1,2-NQ和PQ诱导肺组织损伤及相关血液学变化29-44
• 1 实验材料29-30
• 1.1 实验动物29
• 1.2 主要实验试剂29
• 1.3 主要仪器和设备29-30
• 2 实验方法30-32
• 2.1 实验试剂的配制30-31
• 2.2 实验动物分组31
• 2.3 实验方法和样品采集31
• 2.4 小鼠肺脏组织石蜡切片的制作31-32
• 3 实验结果32-39
• 3.1 1,2-NQ和PQ气管灌注,肺组织病理学检测结果32-36
• 3.2 1,2-NQ和PQ气管灌注对血液指标的影响36-39
• 4 讨论39-42
• 参考文献42-44
• 试验二 1,2-NQ和PQ对肺上皮细胞和巨噬细胞凋亡和坏死影响的研究44-57
• 1 实验材料44-45
• 1.1 实验细胞44
• 1.2 主要实验试剂44
• 1.3 主要实验仪器44
• 1.4 试剂的配制44-45
• 2 实验方法45-46
• 2.1 A549细胞的培养及分组45-46
• 2.2 dU937细胞的培养及分组46
• 3 实验数据处理46
• 4 实验结果46-53
• 4.1 1,2-NQ和PQ染毒对A549细胞凋亡和坏死的影响46-49
• 4.2 1,2-NQ和PQ染毒对dU937细胞凋亡和坏死的影响49-53
• 5 讨论53-56
• 5.1 1,2-NQ和PQ染毒对A549细胞凋亡和坏死的影响53-54
• 5.2 1,2-NQ和PQ染毒对dU937细胞凋亡和坏死的影响54-56
• 参考文献56-57
• 试验三 1,2-NQ和PQ对肺上皮细胞和巨噬细胞炎症细胞因子表达的影响57-74
• 1 实验材料57-58
• 1.1 实验细胞57
• 1.2 主要实验试剂57
• 1.3 主要实验仪器57-58
• 2 实验准备58
• 2.1 50×TAE缓冲液配制58
• 2.2 1%琼脂糖凝胶的配制58
• 3 实验方法58-61
• 3.1 样本采集58-59
• 3.2 引物合成59
• 3.3 RNA提取59-60
• 3.4 琼脂糖凝胶电泳检测mRNA完整性60
• 3.5 cDNA合成60-61
• 3.6 荧光定量PCR方法检测相关基因的mRNA表达61
• 3.7 数据处理和统计分析61
• 4 实验结果61-70
• 4.1 总RNA提取结果61-62
• 4.2 1,2-NQ诱导A549细胞炎症细胞因子基因的相对表达量62-64
• 4.3 PQ诱导A549细胞炎症细胞因子基因的相对表达量64-66
• 4.4 1,2-NQ诱导dU937细胞炎症细胞因子的基因相对表达量66-68
• 4.5 PQ诱导dU937细胞炎症细胞因子的基因相对表达量68-70
• 5 讨论70-72
• 5.1 1,2-NQ诱导A549细胞炎症细胞因子的基因相对表达量70
• 5.2 PQ诱导A549细胞炎症细胞因子的基因相对表达量70-71
• 5.3 1,2-NQ诱导dU937细胞炎症细胞因子的基因相对表达量71
• 5.4 PQ诱导dU937细胞炎症细胞因子的基因相对表达量71-72
• 参考文献72-74
• 全文结论74-75
• 致谢75-76

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：949633