联合应用泛素分子基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒的构建及鉴定

发布时间：2017-10-09 12:38

  本文关键词：联合应用泛素分子基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒的构建及鉴定

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【摘要】：目的构建含有泛素(ubiquitin,Ub)基因的汉滩病毒嵌合基因Gn S0.7和Gc S0.7重组腺病毒。方法通过PCR扩增获得Ub基因,分别克隆入本室已构建的重组腺病毒转移载体p Shuttle-p CAG-Gn S0.7和p Shuttle-p CAG-Gc S0.7中,进一步通过双酶切将转移载体中的嵌合基因分别克隆入腺病毒载体,得到重组腺病毒载体r Ad-p CAG-Ub-Gn S0.7和r Adp CAG-Ub-Gc S0.7,使用PacⅠ线性化后转染HEK293细胞,包装后获得重组腺病毒,感染HEK293细胞后用免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测表达产物。结果限制性内切酶酶切鉴定、PCR扩增和测序结果显示,各重组腺病毒转移载体及重组腺病毒载体构建正确。IFA检测到各重组腺病毒中目的蛋白的表达。结论成功制备了含有Ub基因的汉滩病毒嵌合基因Gn S0.7和Gc S0.7重组腺病毒,为进一步研究联合Ub基因的汉滩病毒重组腺病毒的免疫学特性奠定了实验基础。
【作者单位】： 第四军医大学微生物学教研室;
【关键词】： 汉坦病毒 腺病毒科 泛素
【基金】：国家自然科学基金面上项目(31070810);国家自然科学基金青年项目(81001344)
【分类号】：R373
【正文快照】： 汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)隶属于布尼亚病毒科汉坦病毒属。1976年,韩国学者李镐汪于该国疫区汉滩河流域黑线姬鼠的肺组织中首次成功分离该病毒[1]。该病毒主要宿主为鼠类等啮齿类动物,一般通过动物排泄物污染而经由呼吸道、消化道及破损的皮肤等途径传播给人类,引起肾综合

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本文编号：1000301