小鼠肝脏细胞的DANCE反应及其机制

发布时间：2017-10-09 22:16

  本文关键词：小鼠肝脏细胞的DANCE反应及其机制

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【摘要】：目的：研究全反式维甲酸（RA）、乙醇等药物作用下，以及S180荷瘤病理变化的条件下，小鼠肝脏细胞的DANCE反应，并在蛋白质水平上分析DANCE反应的组织细胞代谢变化，探讨肝脏细胞DANCE反应的发生机制。 方法： 1.正常昆明小鼠，雌雄各半，20-25g/只。以脱臼法处死小鼠，取小鼠肝脏组织约0.15g，加600μl生理盐水并匀浆，取200μl肝匀浆进行不连续蔗糖密度梯度离心(DSGC)。蔗糖密度梯度从上到下依次为30%、40%、50%、60%、70%（w/v），离心速度为3500RPM（约1650g），时间5min，分离得3条细胞带，分别为S40、S50、S60（“S”代表蔗糖Sucrose）。通过对各条带的HE染色，分析DSGC条带的组成成分。 2.对昆明小鼠进行全反式维甲酸（RA）灌胃，以不同RA剂量和不同作用时间制备RA反应模型，以上述方法测定RA引起的小鼠肝脏细胞的DANCE反应，分析其剂量、时间的依赖性。 3.以75%乙醇对昆明小鼠灌胃，按上述方法测定乙醇引起的小鼠肝脏细胞的DANCE反应，分析其剂量、时间的依赖性。小鼠血清以全自动生化分析仪检测其AST、ALT活力水平(广州华侨医院检验中心)，分析肝脏细胞DANCE反应与血清AST、ALT活力水平变化的关系。 4.构建S180荷瘤小鼠模型，按上述方法测定种瘤后不同时间小鼠肝脏细胞的DANCE反应，分析肝脏细胞DANCE反应与S180肿瘤形成的关系。 5.采用ELISA、全自动生化分析仪检测不同时间点S180荷瘤小鼠血清CRP、ALT含量变化。 结果： 1.正常昆明小鼠肝脏细胞经DSGC分离得到三条分离条带，即S60、S50、S40（分别位于60%、50%和40%蔗糖梯度层之上）。经HE染色分析，三条带的成分主要是肝脏的组织碎片，各碎片由几个至十几个数量不等的肝细胞组成，且各碎片的肝细胞形态和大小基本一致。 2. RA灌胃可引起小鼠肝脏细胞发生DANCE-UP（条带上移）反应，且DANCE-UP反应与RA的剂量、时间具有明显的依赖性关系。 3.乙醇灌胃可引起小鼠肝脏细胞发生DANCE-UP反应，并且与乙醇的剂量、时间具有明显的依赖性关系。全自动生化分析仪检测结果显示，，相比于对照组，乙醇组小鼠的血清ALT、AST的活力水平明显升高。 4.接种S180肿瘤细胞后，在不同时间点的小鼠肝脏细胞发生不同程度的DANCE反应，其中，接种S180肿瘤细胞后第10天与第25天，小鼠肝脏细胞的DANCE反应概率最高。 5. ELISA和全自动生化分析仪检测结果显示，S180荷瘤小鼠血清CRP和ALT含量均较对照组的高，且具有显著性差异。结论：在经口给药条件下，RA和乙醇可引起小鼠肝脏细胞发生不同程度DANCE反应，且与药物剂量和给药时间具有明显的依赖关系；在S180肿瘤形成与发展病理过程中，小鼠肝脏细胞出现规律性的DANCE反应；小鼠血清的CRP和ALT的含量改变，提示至少部分肝脏细胞发生免疫/炎症反应或凋亡，这可能是肝脏DANCE发生的机制之一。
【关键词】：DSGC DANCE 小鼠肝脏细胞 S180荷瘤小鼠
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R3416
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 目录8-10
• 绪论10-17
• 1. 离心技术10
• 2. 密度梯度离心法10-11
• 3. 不连续蔗糖密度梯度离心11-12
• 4. 细胞反应12
• 5. 细胞DANCE反应12-14
• 6. 动物肝脏组织细胞 DANCE 反应的生物学意义14-16
• 7. 本研究目的16-17
• 实验材料与方法17-27
• 1 实验材料17-20
• 1.1 实验动物17
• 1.2 实验细胞17
• 1.3 试剂及耗材17
• 1.4 实验仪器17-18
• 1.5 试剂配制18-20
• 1.5.1 0.9%生理盐水配制18
• 1.5.2 蔗糖浓度配置18-19
• 1.5.3 乙醇溶液的配制19
• 1.5.4 全反式维甲酸（RA）溶液的配制19-20
• 2 实验方法20-27
• 2.1 小鼠肝脏细胞 HE 染色20-21
• 2.1.1 正常小鼠肝脏细胞 DSGC 分离20
• 2.1.2 小鼠肝脏 S60、S50、S40 条带 HE 染色20-21
• 2.2 全反式维甲酸（RA）引起小鼠肝脏细胞 DANCE 反应的研究21-22
• 2.2.1 实验分组21
• 2.2.2 小鼠灌胃21-22
• 2.2.3 RA 与小鼠肝脏细胞 DANCE 反应的关系22
• 2.3 乙醇引起小鼠肝脏细胞DANCE反应的研究22-23
• 2.3.1 实验分组22
• 2.3.2 血清收集22-23
• 2.3.3 小鼠肝脏 DANCE 反应分析23
• 2.3.4 血清 ALT、AST 活力检测23
• 2.4 S180荷瘤小鼠肝脏细胞的DANCE反应及其机制研究23-26
• 2.4.1 实验分组23
• 2.4.2 S180细胞的复苏及小鼠腹水瘤制备23-24
• 2.4.3 S180 荷瘤小鼠模型的建立24
• 2.4.4 S180 荷瘤小鼠处理24
• 2.4.5 S180 荷瘤小鼠 DANCE 反应测定24
• 2.4.6 S180 荷瘤小鼠血清 CRP、ALT 水平检测24-26
• 2.5 统计学分析26-27
• 实验结果与分析27-40
• 1 小鼠肝脏细胞HE染色27-29
• 1.1 小鼠肝脏细胞HE染色结果27
• 1.2 小鼠肝脏细胞S60、S50、S40 HE染色结果分析27-29
• 2 RA与小鼠肝脏细胞的DANCE反应29-31
• 2.1 RA作用下的小鼠肝脏细胞DSGC反应结果29-31
• 2.2 RA作用下小鼠肝脏细胞的DANCE反应分析31
• 3 乙醇引起的小鼠肝脏细胞 DANCE 反应机制的研究31-35
• 3.1 乙醇引起的小鼠肝脏细胞DANCE反应测定31-33
• 3.2 小鼠血清ALT和AST活力检测结果33-34
• 3.3 乙醇引起的小鼠肝脏细胞DANCE反应和血清ALT、AST水平变化的分析34-35
• 4 S180荷瘤小鼠肝脏细胞的DANCE反应及其反应机制研究35-40
• 4.1 S180荷瘤小鼠的DANCE反应测定结果35-36
• 4.2 ELISA测定血清CRP和全自动生化分析仪测定血清ALT活力的结果36-37
• 4.3 荷瘤小鼠肝脏细胞 DANCE 反应与血清 ALT 和 CRP 的变化趋势37-38
• 4.4 S180 荷瘤小鼠肝脏细胞的 DANCE 反应及其反应机制分析38-40
• 讨论40-44
• 1 肝脏细胞的 DANCE 反应40-41
• 2 肝脏细胞的 DANCE 反应机制41-44
• 参考文献44-47
• 全文总结47-48
• 不足与展望48-49
• 英文缩略词49-50
• 致谢50-51
• 在校期间发表的论文51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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2 杨苏;密度梯度离心技术的探讨[J];宁德师专学报(自然科学版);1998年04期

3 张年辉;;优化的蔗糖密度梯度离心法分离完整叶绿体[J];实验技术与管理;2010年07期

4 陈萍;王红宁;胡慧琼;黄勇;柳萍;;应用不连续密度梯度离心纯化禽传染性支气管炎冠状病毒[J];中国兽医杂志;2007年07期

本文编号：1002719