亚精胺诱导Hela细胞自噬与降低细胞活力关系的研究

发布时间：2017-10-10 20:14

  本文关键词：亚精胺诱导Hela细胞自噬与降低细胞活力关系的研究

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【摘要】：亚精胺是广泛分布于生物体内的一种多胺类物质,在细胞增殖、机体衰老等生物学过程中发挥重要作用,其在诱导自噬方面的作用成为近年来的研究热点。研究表明,外源性亚精胺可诱导细胞自噬、抑制细胞增殖,但其是否能降低癌细胞活力及其诱导的自噬与降低癌细胞活力之间是否具有相关性的研究还未见报道。本文旨在研究亚精胺诱导癌细胞自噬及其诱导的自噬对细胞活力的影响,探究亚精胺诱导癌细胞自噬与活性氧自由基(ROS)的调控关系,探讨线粒体在亚精胺诱导的癌细胞自噬以及对细胞活力影响中的作用。 本研究以人宫颈癌Hela细胞为实验材料,以亚精胺为处理药物,结合自噬抑制剂三甲基腺嘌呤进行了以下研究：用噻唑蓝比色法检测亚精胺及其诱导的自噬对细胞活力的影响；用透射电子显微镜观察亚精胺诱导细胞内形成自噬体或自噬溶酶体的情况；用蛋白质免疫印记技术检测亚精胺对细胞内自噬标志性分子LC3蛋白表达的变化；用流式细胞术检测亚精胺诱导的自噬对细胞内活性氧自由基的影响及细胞内线粒体膜电位的变化。 通过研究,得到以下实验结果：不同浓度亚精胺(0、0.1、0.5、1.0mM)处理Hela细胞8h后均显著抑制了Hela细胞的活力(p0.05),0.5mM亚精胺使细胞活力下降至对照组的65.45%;0.5mM亚精胺处理Hela细胞8h后,在透射电镜下观察到自噬体和自噬溶酶体形成,自噬标志性蛋白LC3的表达变化(LC3-II/LC3-I)为对照组的1.83倍(p0.05)；0.5mM亚精胺与自噬抑制剂联合处理Hela细胞8h,细胞活力显著上升了9.75%(p0.05)；0.5mM和1.0mM亚精胺处理Hela细胞8h,细胞内ROS含量分别显著下降14.18%和15.36%(p0.05),亚精胺与自噬抑制剂联合处理细胞后,ROS水平显著升高(p0.05),但不能完全恢复：0.5mM和1.0mM亚精胺连续处理细胞8h后,线粒体膜电位均分别显著下降至对照组的62.59%和61.90%(p0.05)。 综上所述,本研究证明了亚精胺诱导Hela细胞发生的自噬性死亡为降低细胞活力的原因之一,其诱导自噬可调控细胞内部分ROS,而亚精胺造成的线粒体膜电位急剧下降可能介导了对细胞自噬的诱导和对细胞活力的影响。
【关键词】：亚精胺 细胞自噬 细胞活力 活性氧自由基 Hela细胞
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-8
• 第一章 前言8-18
• 1.1 亚精胺8-10
• 1.2 自噬10-15
• 1.2.1 自噬的简介10-14
• 1.2.2 自噬与ROS14-15
• 1.3 亚精胺、自噬与肿瘤15-17
• 1.3.1 亚精胺与肿瘤细胞增殖15-16
• 1.3.2 自噬与肿瘤细胞增殖16-17
• 1.4 研究目的和意义17-18
• 第二章 实验材料与方法18-27
• 2.1 实验材料18-20
• 2.1.1 细胞系18
• 2.1.2 试剂与材料18-19
• 2.1.3 主要溶液配制19-20
• 2.1.4 主要实验仪器20
• 2.2 实验方法20-26
• 2.2.1 细胞培养20-21
• 2.2.2 细胞活力的检测21-22
• 2.2.3 细胞超微结构改变的观察22
• 2.2.4 细胞内LC3蛋白表达变化的检测22-24
• 2.2.5 自噬对细胞活力影响的检测24
• 2.2.6 细胞内ROS的检测24-25
• 2.2.7 线粒体膜电位的检测25-26
• 2.3 统计学分析26-27
• 第三章 实验结果27-34
• 3.1 亚精胺对Hela细胞活力的影响27
• 3.2 亚精胺对Hela细胞自噬的诱导27-30
• 3.2.1 亚精胺诱导Hela细胞自噬的形态学观察28
• 3.2.2 亚精胺诱导Hela自噬的标志性蛋白的检测28-30
• 3.3 亚精胺诱导Hela细胞自噬对细胞活力的影响30-31
• 3.4 亚精胺诱导Hela细胞自噬对ROS的影响31-32
• 3.5 亚精胺对线粒体膜电位的影响32-34
• 第四章 讨论34-38
• 4.1 亚精胺诱导Hela细胞自噬对细胞活力的影响34-36
• 4.2 亚精胺诱导Hela细胞自噬对ROS的影响36
• 4.3 亚精胺对线粒体膜电位的影响36-38
• 第五章 结论38-39
• 参考文献39-44
• 在学期间的研究成果44-45
• 致谢45

【参考文献】

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本文编号：1008379