犬博卡病毒非结构基因NP1多克隆抗体的制备与鉴定

发布时间：2017-10-10 21:29

  本文关键词：犬博卡病毒非结构基因NP1多克隆抗体的制备与鉴定

  更多相关文章： 犬博卡病毒 NP基因 多克隆抗体

【摘要】：目的:制备犬博卡病毒(MVC)的非结构基因NP1的兔多克隆抗体,并进行特异性鉴定。方法:以MVC的感染性克隆pI-MVC为模板,构建NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,转化大肠杆菌BL21后,在异巯基-1-硫代-β呋喃半乳糖(IPTG)诱导下,表达谷胱甘肽S-转移酶(GST)-NP1蛋白。用亲和层析纯化的融合蛋白免疫大白兔,制备NP1抗血清并用ELISA法测定抗血清效价。采用Western blotting和免疫荧光法检测NP1抗血清的特性。结果:成功构建MVC NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,在大肠杆菌中获得高效表达。表达产物经亲和层析纯化后得到高纯度的NP1融合蛋白,以其免疫大白兔获得NP1多抗血清,ELISA法检测效价达到1∶400 000。Western blotting法及免疫荧光检测,所得抗血清具有较高的效价及特异性。结论:本研究利用原核表达的MVC GST-NP1融合蛋白制备的NP1抗血清效价高、特异性高,为进一步深入研究NP1在MVC感染及致病分子机制中的作用奠定了基础。
【作者单位】： 宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系;
【关键词】： 犬博卡病毒 NP基因 多克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金资助课题(81060130)
【分类号】：R392
【正文快照】： of MVC infection.呼吸道感染是威胁人类健康的重要疾病,90%以上的急性呼吸道感染由病毒引起,如流感病毒、甲型禽流感病毒、副流感病毒和呼吸道合胞病毒等[1]。2005年9月瑞典学者Allander等[2]报道在呼吸道感染者的呼吸道分泌物中发现新的细小病毒,被命名为人博卡病毒(human b

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 李建宁;姚青;孙玉宁;;博卡病毒属基因组特征与致病的分子机制[J];微生物学报;2013年05期

2 孙彬;李永淑;董衍明;刘凯于;杨勇波;李毅;;人博卡病毒HBoV1非结构蛋白NP1对细胞转录因子的调控[J];微生物学报;2013年07期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李红学;李武平;;人类博卡病毒的研究进展[J];中国输血杂志;2014年03期

2 叶星宇;聂奎;聂福平;;猪博卡病毒感染及检测方法研究进展[J];动物医学进展;2014年06期

3 崔换弟;金玉;谢广成;段招军;;人博卡病毒I型的研究进展[J];病毒学报;2014年01期

4 周宏专;;猪博卡病毒研究概述[J];动物医学进展;2014年08期

5 邓中华;曹友德;;人博卡病毒病毒样颗粒研究进展[J];国际检验医学杂志;2014年14期

6 李芳;闫琰;张茜;李建宁;姚青;高玉婧;杨怡;孙玉宁;;慢病毒介导的犬WRD细胞p53基因沉默及稳定感染细胞系的建立[J];南方医科大学学报;2014年12期

7 陈如敬;吴学敏;车勇良;王隆柏;严山;魏宏;刘玉涛;周伦江;;猪博卡病毒非结构蛋白NP1基因的克隆及基因分型研究[J];中国畜牧兽医;2015年02期

8 张烨健;;动物博卡病毒研究综述[J];上海畜牧兽医通讯;2014年05期

9 李建宁;姚青;孙玉宁;;博卡病毒属基因组特征与致病的分子机制[J];微生物学报;2013年05期

10 周涛;杨晶艳;杜晓昕;陈凡;董泽丰;刘娱;许欣;裴晓方;;成都地区儿童腹泻症候群人博卡病毒监测及基因变异分析[J];现代预防医学;2014年03期

中国博士学位论文全文数据库 前5条

1 赵慧;儿童腹泻相关的人博卡病毒2型的初步研究[D];北京协和医学院;2013年

2 李京京;人类博卡病毒HBoV1基因组克隆及转录、翻译分子机制研究[D];华中师范大学;2012年

3 董衍明;人细小病毒B19非结构蛋白对启动子的调控及其出核转运机制研究[D];华中师范大学;2013年

4 邓雪锋;人类博卡病毒感染性克隆的构建及体外感染模型的研究[D];华中师范大学;2013年

5 孙彬;人博卡病毒（HBoV1）非结构蛋白NP1基因功能的研究[D];华中师范大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 欧阳锦凤;人博卡病毒结构蛋白VP1u，非结构蛋白ORFx和NP1的原核表达与抗体制备[D];华中师范大学;2011年

2 张宏彪;猪博卡病毒在我国部分地区的分子流行病学调查及其荧光定量PCR方法的建立与应用[D];南京农业大学;2012年

3 郝瑞;呼吸道感染住院儿童中HBoV1的流行情况及其基因突变与病毒载量关系研究[D];重庆医科大学;2013年

4 孔雯骅;武汉地区人偏肺病毒的分子流行病学研究[D];华中科技大学;2013年

5 李永淑;人类博卡病毒-1型启动子分析及非结构蛋白NS1反式作用的研究[D];华中师范大学;2014年

6 尹芳;苏州地区儿童呼吸道病毒流行病学及人类博卡病毒感染的临床特征分析[D];苏州大学;2014年

7 李金松;应用非序列依赖单引物PCR（SISPA-PCR）技术筛查腹泻相关的病毒[D];中国疾病预防控制中心;2010年

8 李玲;不同检测方法在儿童急性下呼吸道人博卡病毒感染诊断中的应用[D];苏州大学;2014年

9 李红学;人博卡病毒在健康献浆人群中的基因组和血清学抗体流行情况研究[D];北京协和医学院;2014年

10 陈龙;p53在MVC感染致靶细胞WRD凋亡中的分子机制研究[D];宁夏医科大学;2014年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 杨晚竹;黄灿平;段招军;;猪博卡病毒环状附加体的发现与鉴定[J];病毒学报;2012年04期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 罗迪贤;刘巧突;林应标;戴国知;夏承来;何志雄;张治明;许灿新;廖端芳;;人类博卡病毒基因组序列与进化分析[J];实用预防医学;2006年06期

2 林峰;;人博卡病毒感染的研究进展[J];病毒学报;2007年02期

3 傅希;伍严安;;博卡病毒的研究进展[J];医学综述;2007年15期

4 严华杰;盛军;董蔚;管丽华;王蔚;王凯;任培君;邵洁;;上海嘉定地区连续3年儿童人博卡病毒感染的研究[J];临床儿科杂志;2010年06期

5 陈倩;胡正;;人博卡病毒的研究进展[J];中国当代儿科杂志;2010年08期

6 李建宁;姚青;孙玉宁;;博卡病毒属基因组特征与致病的分子机制[J];微生物学报;2013年05期

7 何涛君;王琼;何英;黄烈;张银辉;林广裕;陆学东;;采用半巢式PCR技术从临床标本中克隆人类博卡病毒的全基因[J];国际检验医学杂志;2014年01期

8 林峰;曾爱平;杨宁敏;林海燕;郑昌华;李桦;陈弘;李旭阳;郁明素;杨宝顺;金大智;;小儿人博卡病毒感染临床与实验研究[J];医学研究杂志;2006年09期

9 黄头华;;我国医学界首次发现人类博卡病毒[J];中国医药指南;2006年09期

10 曾玫;朱启昒;;人博卡病毒的研究进展[J];中华儿科杂志;2007年09期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 曹虹;彭亮;;新型微小病毒——人类博卡病毒[A];新发和再发传染病防治热点研讨会论文集[C];2009年

2 林峰;曾爱平;杨宁敏;林海燕;郑昌华;李桦;陈弘;李旭阳;郁明素;金大智;王升启;;小儿博卡病毒感染的临床与实验研究[A];2006（第三届）江浙沪儿科学术会议暨浙江省儿科学术年会论文汇编[C];2006年

3 林峰;曾爱平;林海燕;郑昌华;李桦;陈弘;李旭阳;郁明素;杨宁敏;金大智;王升启;;小儿博卡病毒感染的临床与实验研究[A];中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编[C];2006年

4 陆学东;林广裕;周仁彬;王琼;林创兴;杨来智;陆长东;;广东地区首例人博卡病毒的检出及鉴定[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年

5 王婷;李昌崇;陈小芳;聂颖;崇蕾;;温州地区人博卡病毒在急性喘息患儿中的检测及其病毒载量与疾病严重程度的相关分析[A];2012年江浙沪儿科学术年会暨浙江省医学会儿科学分会学术年会、儿内科疾病诊治新进展国家级学习班论文汇编[C];2012年

6 林峰;;人博卡病毒感染支气管上皮细胞的生物学特征研究[A];2008年浙江省儿科学学术年会论文汇编[C];2008年

7 王婷;李昌崇;陈小芳;聂颖;崇蕾;;温州地区人博卡病毒在急性喘息患儿中的检出及其病毒载量与疾病严重程度的相关分析[A];中华医学会第十三届全国儿科呼吸学术会议论文汇编[C];2012年

8 李芳;孙玉宁;张茜;芦晓红;;博卡病毒MVC在不同种属细胞系病毒基因组复制及感染特性分析[A];中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2011年

9 何彪;杨凡力;涂长春;;中国蝙蝠病毒宏基因组学研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年

10 王维;林书祥;黄敬孚;徐晓华;;天津地区婴幼儿腹泻博卡病毒的检出及鉴定[A];中华医学会第十七次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2012年

中国重要报纸全文数据库 前8条

1 记者　 邓明 通讯员　 白培生 刘巧突;郴州在国内首次发现人类博卡病毒[N];湖南日报;2006年

2 陈茂j 赵斌;温岭市一院在我国首次发现人博卡病毒[N];中国医药报;2006年

3 记者 吴德群;口岸连查4宗 人感染博卡病毒[N];深圳特区报;2012年

4 记者 王理略 通讯员 任丽琼;首次克隆出人博卡病毒全基因组[N];湖北日报;2014年

5 贵州大学动物科学学院 郝飞 汤德元;猪博卡病毒研究进展[N];河北科技报;2012年

6 记者　 龙军;我国首次发现人类博卡病毒HBoV[N];光明日报;2006年

7 洪卫 张敏;迎接照耀医学高峰的新曙光[N];浙江日报;2006年

8 何彪 沈基飞;我学者发现新型SARS样冠状病毒[N];健康报;2014年

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 程卫霞;博卡病毒流行病学、致病性及基因进化研究[D];兰州大学;2011年

2 赵慧;儿童腹泻相关的人博卡病毒2型的初步研究[D];北京协和医学院;2013年

3 邓雪锋;人类博卡病毒感染性克隆的构建及体外感染模型的研究[D];华中师范大学;2013年

4 李京京;人类博卡病毒HBoV1基因组克隆及转录、翻译分子机制研究[D];华中师范大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 马均;儿童急性呼吸道感染人博卡病毒检测及分析[D];吉林大学;2009年

2 梁丹丹;小儿呼吸道人类博卡病毒感染免疫致病机制的初步研究[D];汕头大学;2011年

3 杨晚竹;猪博卡病毒分子生物学特征及感染性克隆构建的初步探索[D];中国疾病预防控制中心;2012年

4 漆正宇;我国人博卡病毒的分子流行病学及衣壳蛋白独有区表达纯化的研究[D];贵州大学;2007年

5 韩虎;人博卡病毒结构蛋白与非结构蛋白功能的初步研究[D];华中师范大学;2012年

6 李红学;人博卡病毒在健康献浆人群中的基因组和血清学抗体流行情况研究[D];北京协和医学院;2014年

7 丁媛;重庆地区儿童呼吸道博卡病毒感染特点[D];重庆医科大学;2007年

8 周琼华;人博卡病毒在急性下呼吸道感染住院儿童中的现状分析[D];湖南师范大学;2011年

9 张宏彪;猪博卡病毒在我国部分地区的分子流行病学调查及其荧光定量PCR方法的建立与应用[D];南京农业大学;2012年

10 李玲;不同检测方法在儿童急性下呼吸道人博卡病毒感染诊断中的应用[D];苏州大学;2014年

，

本文编号：1008731