发育与衰老相关疾病基因APP,BACE2在非洲爪蛙早期胚胎时空表达

发布时间：2017-10-14 12:11

  本文关键词：发育与衰老相关疾病基因APP,BACE2在非洲爪蛙早期胚胎时空表达

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【摘要】：目的：研究发育与衰老相关疾病基因APP，BACE2在非洲爪蛙早期胚胎时空表达 材料和方法：分子克隆构建质粒，胚胎原位杂交，RT-PCR定量分析，细胞培养与转染，蛋白表达检测，胚胎组织切片免疫荧光检测。 结果：成功构建爪蛙APP，BACE2质粒克隆并转染细胞检测表达通过原位杂交和免疫荧光检测早期胚胎中APP和BACE2的表达图示并对APP进行了功能结构域分析，验证了BACE2基因水解Aβ的作用，进一步研究了RCAN1基因可能与APP的相互作用。 结论：我们描述了APP和BACE2基因在爪蟾发育过程并比较了其在眼睛和大脑早期的时空表达图式。氨基酸序列的比对分析显示具有高度的保守。 RT-PCR分析表明，Xl.bace2和Xl.rcan1转录可以明显检测到从囊胚阶段到原肠胚后期阶段，其表达仍维持在较高水平，直到神经胚阶段。可以在stage30，40期和45期检测到这些基因的高表达。结果表明，在发育过程中，这些基因表达的检测主要是内源性蛋白表达。与以前的原位杂交和免疫组化数据，我们观察到这些基因的表达在多种组织和细胞类型，包括中枢和外周神经系统，神经视网膜，咽中胚层和内胚层和它们的衍生物（颅面结构，，胸腺和气管），心血管系统（心脏流出道，颈动脉，脐船，窦房结与心房中隔），胃肠道系统（口腔上皮，胃，胰腺，肠系膜）。
【关键词】：爪蟾 发育 表达
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R339.38
【目录】：

• 英汉缩略语名词5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 前言10-11
• 1、材料和方法11-24
• 1.1 材料11-13
• 1.1.1 实验动物11
• 1.1.2 细胞11
• 1.1.3 主要试剂11-13
• 1.1.4 仪器13
• 1.2 实验方法13-24
• 1.2.1 相关基因质粒构建13
• 1.2.2 非洲爪蟾胚胎的获取13-14
• 1.2.3 胚胎 RNA 提取及 RT-PCR 定量分析14-15
• 1.2.4 爪蟾胚胎原位杂交15-18
• 1.2.5 细胞培养及转染18-20
• 1.2.6 蛋白表达检测（Western blotting）20-23
• 1.2.7 胚胎组织切片免疫荧光染色23-24
• 2、结果24-33
• 2.1 APP 的克隆和表达24-26
• 2.2 APP 的表达图示及功能结构域分析26-28
• 2.3 BACE2 基因切割 APP 的作用28-30
• 2.4 BACE2 的时空表达图示30-32
• 2.5 RCAN1 基因可能与 APP 的相互作用32-33
• 3、讨论与总结33-34
• 参考文献34-35
• 文献综述35-52
• 参考文献44-52
• 致谢52-53
• 攻读硕士学位期间的研究成果和发表论文53-54

【参考文献】

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1 高文明;;淀粉样前体蛋白研究进展[J];济宁医学院学报;2010年02期

本文编号：1030972