河南猪流感病毒H3N2分离株NP基因表达及抗原性分析

发布时间：2017-10-14 14:24

  本文关键词：河南猪流感病毒H3N2分离株NP基因表达及抗原性分析

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【摘要】：目的表达猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)H3N2分离株NP基因,获得具有良好抗原性的NP蛋白。方法 PCR扩增猪流感病毒A/swine/Henan/2/2008(H3N2)NP基因,经EcoR I和Xho I双酶切后插入p ET32a(+)载体,并转化大肠杆菌Rosset(DE3)菌株;PCR、EcoR I和Xho I双酶切及DNA测序鉴定重组质粒p ET32a-NP;IPTG诱导,表达、纯化NP并免疫家兔制备免疫血清,SDS-PAGE、WB测其反应原性;同时构建pc DNA3.1-NP并转染293T细胞,免疫荧光检测其免疫源性。结果成功构建重组载体p ET32a-NP和pc DNA3.1-NP,SDS-PAGE和WB显示融合蛋白约80 k D,能与感染SIV的猪血清特异性反应,并且纯化蛋白制备的多克隆血清能识别293T细胞中表达的NP蛋白。结论正确表达SIV H3N2 NP蛋白,并有良好的抗原性,为研究猪流感病毒NP诊断抗原和亚单位疫苗奠定基础。
【作者单位】： 河南科技学院动物科学学院;动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心;滑县动物卫生监督所;
【关键词】： 猪流感病毒 NP基因 表达 抗原性
【基金】：河南省科技计划项目基础与前沿技术(142300410138)
【分类号】：R373.13
【正文快照】： 猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)不仅引起病猪呼吸困难及其他病毒和细菌继发感染,给养猪业造成重大经济损失,而且严重威胁人类健康[1]。2009年H1N1猪流感病毒引发的流感疫情[2]再次警示人们控制猪流感即是从源头上控制人流感。而有效的诊断和预防是控制猪流感的前提。

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