家蝇热休克蛋白HSP20基因克

发布时间：2017-10-16 00:23

  本文关键词：家蝇热休克蛋白HSP20基因克隆、表达和序列分析

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【摘要】：目的对家蝇热休克蛋白20(HSP20)基因进行生物信息学分析,并进行克隆、表达研究。方法利用美国国家生物技术信息中心和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白序列的分析工具,结合其他生物信息学分析软件包,从Gen Bank上家蝇基因组序列识别出编码HSP20的基因,分析预测该蛋白质的结构功能;设计引物PCR扩增HSP20基因,将其克隆到原核表达质粒PEASY-E1中,重组质粒在大肠杆菌Origmi B/DE3中经用异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)鉴定。结果 HSP20基因序列全长865bp,最大开放阅读框(ORF)为567bp,编码188个氨基酸,理论分子量为21443.2 Da,等电点为5.96;所构建的重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定成功;SDS-PAGE分析结果显示,重组质粒在Origmi B/DE3中表达并纯化,得到的融合蛋白相对分子质量约为21443.2 Da,诱导12 h蛋白表达量最高,SDS-PAGE法得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符。结论成功构建PEASY-E1-HSP20重组原核表达质粒并表达出融合HSP20蛋白,为进一步研究该蛋白的功能奠定基础。
【作者单位】： 贵阳医学院寄生虫学教研室;皖北矿务局煤电集团总医院普外科;贵州省疾病预防控制中心;
【关键词】： 家蝇 热休克蛋白(HSP) 克隆 表达 序列分析
【基金】：国家自然科学基金(81360254;81160204) 国家科技支撑计划课题(2011BAC06B12)
【分类号】：R384
【正文快照】： 热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是生物体在高温或者其他类型的胁迫诱导细胞合成或表达量改变的一类蛋白,最早是由Ritossa对果蝇进行热诱导时发现的[1],能起到稳定和保护其他蛋白质“分子伴侣”的作用[2]。HSP根据分子量的大小分为不同的亚型,分子量介于12~43 k Da的HSP被，

本文编号：1039559