CD38基因缺失对巨噬细胞迁移及其炎症因子释放的影响及机制研究

发布时间：2017-10-17 21:18

  本文关键词：CD38基因缺失对巨噬细胞迁移及其炎症因子释放的影响及机制研究

  更多相关文章： CD38 FOXO1 TLR4 NF-кB MCP-1 Ccr2 炎症反应

【摘要】：背景与目的： 炎症反应在多种疾病尤其是慢性疾病的发生发展中发挥着重要作用，如心血管疾病、癌症、糖尿病等。引起炎症反应的原因很多，其中巨噬细胞的激活及其所引起的多种炎症因子如MCP-1、TNF-α、IL-1β等表达量增加起着重要作用。CD38蛋白分子是一种双功能酶，该酶同时具有环化酶和水解酶活性。它在细胞内以NAD+为底物合成cADPR，同时可以催化cADPR形成ADPR，以此调节NAD+的浓度。一般认为，CD38是哺乳类细胞NAD+的主要代谢酶。本实验室的前期工作发现，CD38基因缺失可显著增加高脂饮食诱导小鼠动脉粥样硬化时的巨噬细胞侵润。本论文通过观察CD38对巨噬细胞迁移，检测炎症相关的转录因子FOXO1、NF-кB的表达，探讨CD38基因缺失在巨噬细胞所参与的炎症过程中的作用，并阐明其在炎症反应中可能的分子机制。 实验方法： 1.原代巨噬细胞的提取与培养：体外分离培养小鼠骨髓单核细胞，，经7天体外诱导出高纯度（大于90%）的巨噬细胞用于后续实验。 2.巨噬细胞的迁移：通过划痕实验及transwell实验检测实验组CD38-/-与对照组WT巨噬细胞迁移情况。 3.巨噬细胞基因及细胞因子的分泌：1）利用免疫荧光检测CD38基因缺失对FOXO1核转移影响；2）利用Elisarray检测M1型细胞因子TNF-α、IL-1β及M2型细胞因子IL10、IFN蛋白分泌情况，同时利用Western Blot技术对MCP-1、FOXO1、TLR4、NF-κB、Ccr2蛋白表达量进行检测。 实验结果： 1、利用免疫荧光检测小鼠巨噬细胞特异性标记F4/80阳性率较高，细胞纯度较高满足后续实验。 2、CD38基因缺失促进巨噬细胞的迁移。 3、CD38基因缺失促进FOXO1核转移和炎症相关蛋白MCP-1、TLR4、NF-κB的表达以及M1型细胞因子TNF-α、IL-1β蛋白分泌，对M2型细胞因子IL10、IFN无影响。 4、CD38基因缺失促进单核细胞趋化因子受体CCR2蛋白的表达。 实验结论： CD38基因缺失参与加重巨噬细胞所参与的炎症反应。其具体机制可能通过激活FOXO1/CCR2信号通路促进巨噬细胞迁移，同时激活巨噬细胞TLR4/NF-κB信号通路从而引起炎症因子MCP-1、TNF-α、IL-1β的分泌进而加重炎症反应。
【关键词】：CD38 FOXO1 TLR4 NF-кB MCP-1 Ccr2 炎症反应
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 中英文缩略词表10-11
• 第1章 绪论11-18
• 1.1 CD38 简述11
• 1.2 炎症11-12
• 1.3 与炎症相关的细胞因子12-13
• 1.3.1 细胞因子12
• 1.3.2 单核细胞趋化因子-1（MCP-1）12-13
• 1.3.3 单核细胞趋化因子受体 Ccr213
• 1.4 Sirt1/FOXO1 信号通路13-15
• 1.4.1 Sirt113-14
• 1.4.2 FOXO114-15
• 1.5 TLR4/ NF-кB 与炎症的发生15-18
• 1.5.1 NF-кB15-16
• 1.5.2 TLR416-18
• 第2章 CD38 基因缺失对巨噬细胞迁移的影响18-25
• 2.1 引言18
• 2.2 材料和方法18-22
• 2.2.1 巨噬细胞（macrophage）的原代培养及基因型鉴定18-20
• 2.2.2 巨噬细胞的迁移20-21
• 2.2.3 免疫荧光鉴定骨髓源巨噬细胞纯度21-22
• 2.3 结果22-24
• 2.3.1 巨噬细胞（macrophage）基因型及纯度鉴定22-23
• 2.3.2 CD38 基因缺失促进巨噬细胞迁移23-24
• 2.4 讨论24-25
• 2.4.1 体外培养小鼠骨髓源巨噬细胞24-25
• 第3章 CD38 基因缺失促进 NF-кB 及其调控的下游细胞因子表达25-34
• 3.1 引言25
• 3.2 材料和方法25-28
• 3.2.1 FoxO1 核定位25
• 3.2.2 TLR4、NF-κB、MCP-1 蛋白表达水平检测25-27
• 3.2.3 荧光定量 PCR 检测巨噬细胞炎性因子分泌27-28
• 3.2.4 Elisarray 方法检测骨髓源巨噬细胞炎性因子分泌28
• 3.3 实验结果28-32
• 3.3.1 CD38 基因缺失促进 Foxo1 入核28-29
• 3.3.2 CD38 基因缺失促进 TLR4 表达29
• 3.3.3 CD38 基因缺失促进 NF-κB 及炎症因子表达29-32
• 3.4 讨论32-34
• 3.4.1 Sirt1 对 FoxO1 的影响32
• 3.4.2 TLR4/NF-кB 信号通路32
• 3.4.3 巨噬细胞的分型32-34
• 第4章 CD38 基因缺失促进巨噬细胞 CCR2 表达34-38
• 4.1 引言34
• 4.2 材料和方法34-35
• 4.2.1 Foxo1 下游靶基因生物信息学的预测34-35
• 4.2.2 Ccr2 表达水平检测35
• 4.3 实验结果35-37
• 4.3.1 CD38 基因缺失促进 CCR2 表达35-36
• 4.3.2 确定 CCR2 为 Foxo1 下游靶基因36-37
• 4.4 讨论37-38
• 第5章 结论38-39
• 致谢39-40
• 参考文献40-46
• 综述46-53
• 参考文献49-53

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 ;豚鼠巨噬细胞经P_(204)处理后的抗石英细胞毒作用[J];国外医学参考资料(卫生学分册);1976年04期

2 邓侠进;;巨噬细胞的抗癌作用[J];遵义医学院学报;1979年02期

3 陆天才;;疾病对肺巨噬细胞的影响[J];煤矿医学;1982年01期

4 郭瑞清;祝彼得;;一种分离巨噬细胞的简单方法[J];滨州医学院学报;1990年02期

5 谢志坚;巨噬细胞异质性[J];医学综述;2001年06期

6 饶艳;运动及神经内分泌对巨噬细胞功能的调节[J];体育与科学;2002年05期

7 朱金元;;吸烟对肺巨噬细胞的影响[J];浙江医学教育;2003年01期

8 张俊峰;过氧化物酶体增殖物激活受体与单核/巨噬细胞系[J];医学综述;2004年03期

9 韦锦学;顾军;;巨噬细胞的激活诱导死亡[J];生命科学;2006年02期

10 李晓曦;郭宁;曹雪涛;;肿瘤相关巨噬细胞促进肿瘤生长与转移的研究现状[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2008年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 史玉玲;王又明;丰美福;;巨噬细胞激活作用的研究[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

2 吴国明;周辉;;巨噬细胞和创伤纤维化[A];2009年浙江省骨科学学术年会论文汇编[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明质酸对于淋巴结巨噬细胞运动的影响[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

4 刘革修;欧大明;刘军花;黄红林;廖端芳;;丙丁酚在体外能抑制巨噬细胞脂质氧化介导的低密度脂蛋白氧化并调节氧化巨噬细胞的分泌功能[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展（下册）[C];1999年

5 叶金善;杨丽霞;郭瑞威;;环氧化酶-2/前列腺素E_2在血管紧张素Ⅱ刺激巨噬细胞表达细胞外基质金属蛋白酶诱导因子中的作用[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年

6 秦帅;陈希;孔德明;;构建由绿色荧光标记巨噬细胞的转基因斑马鱼系[A];贵州省中西医结合内分泌代谢学术会论文汇编[C];2012年

7 武剑华;徐惠绵;;肿瘤相关巨噬细胞在胃癌中的相关研究[A];第9届全国胃癌学术会议暨第二届阳光长城肿瘤学术会议论文汇编[C];2014年

8 何军;;血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体升高巨噬细胞内胆固醇水平[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢达;;PDT诱导的凋亡细胞对巨噬细胞NO合成的影响[A];第七届全国光生物学学术会议论文摘要集[C];2010年

10 张磊;朱建华;黄元伟;姚航平;;血管紧张素Ⅱ对巨噬细胞(THP-1重细胞)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体表达的影响[A];浙江省免疫学会第五次学术研讨会论文汇编[C];2004年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 通讯员 李静 记者 胡德荣;恶性肿瘤巨噬细胞未必皆“恶人”[N];健康报;2014年

2 兰克;以尝试用巨噬细胞治瘫痪[N];科技日报;2000年

3 薛佳;免疫系统——人体的“卫士”[N];保健时报;2009年

4 记者 胡德荣;铁泵蛋白“维稳”铁代谢作用首次阐明[N];健康报;2011年

5 侯嘉 何新乡;硒的神奇功能[N];中国食品质量报;2003年

6 唐颖 倪兵 陈代杰;巨噬细胞泡沫化抑制剂研究快步进行[N];中国医药报;2006年

7 刘元江;新发现解释肿瘤为何易成“漏网之鱼”[N];医药经济报;2007年

8 本报记者 侯嘉 通讯员 何新乡;今天你补硒了吗[N];医药经济报;2003年

9 左志刚;升血小板药使用注意[N];医药养生保健报;2007年

10 记者 许琦敏;“铁泵”蛋白帮助回收铁元素[N];文汇报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 周赤燕;巨噬细胞MsrA对动脉粥样硬化的干预研究[D];武汉大学;2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白调控细胞增殖和炎症的机制研究[D];山东大学;2015年

3 张瑜;DKK1抑制巨噬细胞内脂质沉积及其相关分子机制[D];山东大学;2015年

4 孟涛;异丙酚对心脏收缩功能的抑制作用及其对巨噬细胞分泌功能调节的机制研究[D];山东大学;2015年

5 周兴;基于酵母微囊构建新型口服巨噬细胞靶向递送系统的研究[D];第三军医大学;2015年

6 蒋兴伟;Tim-3对巨噬细胞极化的调控机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2015年

7 刘伯玉;清道夫受体A介导小鼠巨噬细胞吞噬钩端螺旋体研究[D];上海交通大学;2013年

8 杨绍俊;miRNA-155介导ESAT-6诱导巨噬细胞凋亡的分子机制及其在结核诊断中的作用[D];第三军医大学;2015年

9 翟光耀;单核/巨噬细胞Ly6C~(low)亚群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京协和医学院;2014年

10 韩露;TRB3介导的脂肪组织巨噬细胞极化与糖尿病冠状动脉病变关系的研究[D];山东大学;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 马春梅;AP0E~(-/-)小鼠TLR9介导巨噬细胞极化效应对动脉粥样硬化作用的研究[D];福建医科大学;2015年

2 张译丹;盐皮质激素受体拮抗剂调控巨噬细胞表型对实验性矽肺的作用[D];河北医科大学;2015年

3 卢文冉;HCV core蛋白作用的巨噬细胞培养上清对肝细胞生物学性状的影响[D];河北医科大学;2015年

4 李文建;载脂蛋白E影响巨噬细胞因子表达及分型的机制研究[D];河北医科大学;2015年

5 曹爽;高糖对巨噬细胞TLR4信号转导的调节作用[D];河北医科大学;2015年

6 宁程程;肿瘤相关巨噬细胞在子宫内膜癌雌激素敏感性中的作用及机制研究[D];复旦大学;2014年

7 高龙;PLD4在肿瘤相关巨噬细胞抑制结肠癌增殖中的作用研究[D];成都医学院;2015年

8 任虹;感染期子宫颈癌U14细胞荷瘤小鼠抑制巨噬细胞CCL5分泌的机制研究[D];河北医科大学;2015年

9 李美玲;双酚A对小鼠腹腔巨噬细胞极化影响的体外研究[D];安徽医科大学;2015年

10 刘琼;黄芪多糖影响巨噬细胞向脂肪细胞趋化的作用及机制研究[D];新乡医学院;2015年

本文编号：1051106