刚地弓形虫RH株ROP18基因真核表达载体的构建

发布时间：2017-10-19 09:46

  本文关键词：刚地弓形虫RH株ROP18基因真核表达载体的构建

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【摘要】：目的 PCR扩增刚地弓形虫(Toxplasma gondii)棒状体蛋白18(ROP18)基因,构建真核表达载体pVAX1-ROP18,并检验其在真核细胞中的表达。方法 ROP18基因和质粒pVAX1分别经HindⅢ和BamHⅠ双酶切,在T4连接酶作用下连接过夜,将连接产物转化至大肠埃希菌E.coil XL1-Blue感受态细胞,经菌落PCR、双酶切及测序正确的重组质粒pVAX1-ROP18转染至HeLa细胞内。试验设空白对照组和pVAX1空质粒对照。提取各组HeLa细胞的总RNA并将其逆转录成cDNA,分别进行管家基因β-actin和ROP18基因的RT-PCR扩增;采用Western blot法检测转染后各组细胞ROP18蛋白的表达情况。结果经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,ROP18基因的RT-PCR扩增片段大小为1 665bp,与预期值相符;ROP18基因重组质粒转化菌菌落PCR产物经0.8%琼脂糖凝胶电泳鉴定,大小为1 665bp,与预期值相符;双酶切重组质粒得到预期酶切片段;重组质粒的目的基因序列与弓形虫RH株ROP18基因(登录号AM075204.1)序列比对完全一致。脂质体转染后各组β-actin的RT-PCR扩增目的片段均为613bp,与预期值相符;pVAX1-ROP18重组质粒转染组的ROP18的RT-PCR扩增目的片段大小为1 665bp,而其他组无该目的基因条带。Western blot检测重组质粒pVAX1-ROP18能够在HeLa细胞内表达ROP18蛋白。结论成功构建了真核表达载体pVAX1-ROP18,且该重组质粒能够在真核细胞内表达ROP18蛋白。
【作者单位】： 河北北方学院病原生物与免疫学研究所;
【关键词】： 刚地弓形虫 棒状体蛋白 重组质粒 真核表达
【基金】：河北省自然科学基金项目(No.H2013405091) 河北北方学院校级重大课题(No.ZD201312)
【分类号】：R382.5
【正文快照】： ***刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)具有广泛的宿主群,可引起弓形虫病[1]。在多数情况下,弓形虫感染呈隐性感染;在免疫力低下时可呈急性感染而出现严重异常[2-3]。妊娠期感染弓形虫可引起流产,死胎等[4-6]。目前,弓形虫病的防治措施多局限于药物治疗,疗效差。弓形虫疫苗的研究

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本文编号：1060411