MiR-214通过下调Osterix的表达而抑制小鼠多潜能成肌细胞C2C12向成骨细胞分化

发布时间：2017-10-19 10:25

  本文关键词：MiR-214通过下调Osterix的表达而抑制小鼠多潜能成肌细胞C2C12向成骨细胞分化

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【摘要】：Osterix(Osx)是近年发现的成骨细胞分化和骨形成过程中的关键调控因子。Osx基因敲除的小鼠因成骨细胞分化受阻和骨发育的完全缺失在出生后不久就因呼吸困难而死亡。目前,对Osx表达调控机制的研究还比较薄弱。MicroRNA(miRNA)是一类包含19-24个核苷酸的非编码小分子RNA,它在包括生物发育、细胞分化、增殖、生存和肿瘤形成等生物学过程中发挥着重要的作用。在本研究中,我们旨在探讨mi RNAs对Osx的调控作用,从而进一步理解成骨细胞分化的分子机制。我们首先通过生物信息学对Osx的3'UTR进行分析,结果发现Osx 3'UTR上存在两个miR-214的结合位点,于是推测miR-214是Osx的一个潜在调控因子。接着我们分别构建了含有全长Osx 3'UTR和删除了miR-214结合位点的荧光素酶报告质粒,然后将miR-214 mimic与Osx 3'UTR的荧光素酶报告质粒共转染HEK 293T细胞,通过荧光素酶活性检测发现,转染Osx 3'UTR全长的细胞的荧光素酶活性明显降低,而转染删除了miR-214结合位点的质粒的细胞的荧光素酶活性无明显变化,从而证实了miR-214与Osx 3'UTR的结合。同时我们还发现,在人骨肉瘤细胞Saos-2和U2OS中,miR-214的表达和Osx的表达呈反相平行关系,且miR-214对Osx的调控发生在翻译水平。将214 mimic转染高表达Osx的Saos-2细胞,通过western blot检测发现,mi R-214能显著下调Osx蛋白的表达。Real-time PCR的结果表明,在C2C12向成骨细胞分化的过程中,miR-214的表达下降。抑制miR-214表达后,C2C12细胞中成骨细胞分化标志物ALP(alkaline phosphatase,ALP)、Col1a1(collagen type I,Col1a1)和OC(osteocalcin,OC)的表达显著增强。ALP和ARS染色实验也表明,抑制miR-214表达后,C2C12细胞的ALP活性和矿化水平明显升高。因此,本研究首次证明miR-214是Osx的一个新的调控因子,且miR-214通过下调Osx的表达而抑制C2C12细胞向成骨细胞分化。本研究结果进一步丰富了成骨细胞分化关键调控因子Osx表达调控机制的内容,同时揭示了miR-214是成骨细胞分化的抑制因子,从而为阐明骨代谢过程,特别是为骨质疏松及其它骨病的治疗提供帮助。
【关键词】：miR-214 Osterix 成骨分化 C2C12
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-13
• 材料和方法13-26
• 结果26-36
• 讨论36-38
• 小结38-39
• 参考文献39-45
• 综述45-56
• 参考文献51-56
• 附录1:文章发表情况56-58
• 致谢58

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本文编号：1060565