脑缺血预处理对PPARγ信号通路及GLT-1表达的影响

发布时间：2017-10-20 02:14

  本文关键词：脑缺血预处理对PPARγ信号通路及GLT-1表达的影响

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【摘要】：目的：过氧化物酶增殖物激活受体（peroxisome prolifer atoractivatedreceptors, PPAR)是一种配体激活型转录因子，其包括α、β、γ三种亚型。PPARγ作为PPAR家族中的一种亚型，参与调节脂质代谢与糖代谢、脂肪细胞分化、能量平衡、炎症反应等体内多种生理和病理生理过程。近年来研究发现，PPARγ激活后能够保护脑组织对抗缺血性损伤作用。目前，神经系统疾病中最常见的疾病之一是缺血性脑血管病。严重的脑缺血常引起细胞、组织的不可逆性损伤。大量的动物实验证实，预先的短暂、轻度、不至于引起神经元损伤的适当缺血刺激可有效激发机体的内在保护机制，保护机体使其能够耐受随后的严重损伤性缺血，从而提高脑组织对缺血的耐受能力。预先的适当缺血刺激被称为脑缺血预处理（cerebral ischemicpreconditioning, CIP）。自Kitagawa在1990年首次提出这一现象以来，大量的动物实验证实了此现象的存在。本教研室前期实验观察到，脑缺血预处理引起胶质细胞谷氨酸转运体-1(glial glutamate transporter-1, GLT-1)的大量表达而诱导脑缺血耐受。脑缺血预处理是否通过PPARγ信号转导通路诱导GLT-1大量表达目前未见相关报道。本实验旨在观察在大鼠海马CA1区PPARγ的表达及其对GLT-1蛋白表达的相关影响，为将来脑缺血性疾病的防治提供理论依据。 方法：采用四血管闭塞法(Four-vessel occlusion,4VO)制造大鼠全脑缺血模型，选用健康雄性Wister大鼠（280-320g）240只。随机分为以下两部分： 1在脑缺血耐受诱导过程中，大鼠海马CA1区PPARγ蛋白的表达 首先永久凝闭大鼠椎动脉，恢复2天后，进行全脑缺血，然后恢复血流再灌注，具体分组如下（n=45）：①假手术（sham）组：只暴露双侧颈总动脉，不阻断血流；②C IP组：夹闭双侧颈总动脉3min；③损伤性缺血（ischemic insult, Ⅱ）组：夹闭双侧颈总动脉8min；④C IP+Ⅱ组：夹闭双侧颈总动脉3min作为脑缺血预处理，再灌2天后，再次夹闭双侧颈总动脉8min作为损伤性缺血。每个组均分为9个时间点，即假手术处理后或末次缺血后0min、15min、30min、3h、6h、1d、2d、4d和7d（每个时间点n=5）。 在规定的时间点，断头取海马CA1区脑组织，应用Western blot方法观察PPARγ蛋白的表达。 2PPARγ的特异性抑制剂GW9662对GLT-1蛋白表达的影响 具体分组如下：①3%DMSO+CIP+Ⅱ组（n=30）；②GW9662+CIP+Ⅱ（n=30）。CIP前30分钟在侧脑室分别注射3%DMSO或GW9662（剂量为5nmol)，然后同CIP+Ⅱ组。于末次缺血后即刻（0min）、3h、6h、1d、4d、7d时取海马CA1区脑组织，，每个时间点5只，应用western blot法观察GLT-1蛋白的表达，探讨抑制PPARγ信号转导通路对GLT-1蛋白表达的影响。 结果： 1在脑缺血耐受诱导过程中，大鼠海马CA1区PPARγ蛋白的表达 Western blot分析显示，sham组大鼠海马CA1区PPARγ蛋白的表达在各时间点均无显著差异(P＞0.05)。 在脑缺血预处理组，与即刻时间点相比，经脑缺血预处理后，PPARγ蛋白的表达在30min时间点明显升高，于3h时间点表达达到高峰，其积分光密度高达即刻时间点的2.5倍；从6h时间点开始，恢复至即刻时间点水平。 损伤性缺血组，经8min全脑缺血打击后，PPARγ蛋白的表达与即刻时间点相比于15min时间点明显升高(P0.05)；在30min、3h、6h时间点升高更为显著(P0.01)，其积分光密度高达即刻时间点的10倍；在1d、2d、4d时间点虽有所回落，但仍处于较高水平(P0.05)；7d时间点进一步下降，但仍明显高于即刻时间点(P0.05)。上述结果表明，严重缺血打击组8min全脑缺血后PPARγ蛋白的表达明显升高。 在脑缺血预处理+损伤性缺血组（CIP+Ⅱ组）中，PPARγ蛋白的表达与即刻时间相比，在6h时间点明显升高(P0.05)，IOD值为即刻时间点的1.35倍；自2d时间点开始直至7d时间点PPARγ蛋白的表达均明显下降(P0.05)；其余时间点均无显著差异(P＞0.05)。 2PPARγ的特异性抑制剂GW9662对GLT-1蛋白表达的影响 DMSO+CIP+Ⅱ组，在即刻、3h、6h、1d、4d、7d总共六个时间点的GLT-1的蛋白表达均较高。与DMSO+CIP+Ⅱ组的各个相对应的时间点相比较，5nmol GW9662+CIP+Ⅱ组GLT-1蛋白的表达在各个时间点均显著降低(P0.05)。 小结： 1CIP引起PPARγ蛋白的适度上调；损伤性缺血引起PPARγ蛋白的持久而强烈上调；提前2天进行的3min脑缺血预处理，明显抑制了8min损伤性缺血引起PPARγ蛋白的持久而强烈上调。 2PPARγ的特异性抑制剂GW9662阻断脑缺血耐受诱导过程中GLT-1蛋白表达的上调。 结论：脑缺血预处理通过PPARγ调节GLT-1蛋白的表达。
【关键词】：脑缺血预处理 脑缺血耐受 PPARγ GLT-1 Western blot 大鼠
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-12
• 材料与方法12-21
• 结果21-23
• 附图23-28
• 讨论28-30
• 小结30
• 结论30-31
• 参考文献31-33
• 综述 PPARγ及其配体在脑缺血耐受诱导过程中的作用研究33-45
• 参考文献40-45
• 致谢45-46
• 个人简历46

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 耿进霞;张敏;李文斌;郭莉华;李清君;羡晓辉;;凝闭双侧椎动脉预处理对大鼠全脑缺血损伤的防护作用[J];中国应用生理学杂志;2007年01期

2 葛恒,王长谦;PPAR配体作用机制及新配体筛选研究进展[J];中国药学杂志;2004年03期

本文编号：1064661