影响脐带间充质干细胞活性的机制及其保护液的研究

发布时间：2017-10-20 07:25

  本文关键词：影响脐带间充质干细胞活性的机制及其保护液的研究

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【摘要】：背景 间充质干细胞(MSCs, mesenchymal stem cells),是一类具有自我更新,在一定条件下具有多向分化潜能的多能干细胞。脐带来源的间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs)具有MSCs的全部特性,而且其具有来源更加广泛、获取容易、不涉及伦理等优势,现在已广泛应用到临床试验阶段。我们知道UC-MSCs在移植治疗前,需进行脐带的采集预处理、间充质细胞的纯化、传代培养、治疗前UC-MSCs的消化、添加适当的保存液及细胞运输等多个处理环节。这些都会对UC-MSCs的质量以及移植后的治疗效果产生影响。在这些环节中, UC-MSCs的保存是对细胞质量影响最大的一个因素,但是目前并没有与其相关的系统研究。 UC-MSCs在临床移植治疗中,不能将新鲜分离的干细胞直接输注于人体内,它需要先存放在可以输注的保存液(如0.9%氯化钠注射液)中一定时间,再输注入体内。目前临床常用的保存液有0.9%氯化钠注射液、5%葡萄糖注射液,1%人血白蛋白液等,但UC-MSCs在这些保存液中活性会下降,影响临床的治疗效果。但是目前尚未见到研究这些介质影响UC-MSCs活性机理的研究报道。 综上所述,本课题根据上述提出的问题,我们首先测试了目前临床常用0.9%氯化钠注射液,5%葡萄糖注射液,复方电解质注射液(Plasmalyte A),1%人血白蛋白溶液,5%人血白蛋白溶液这五种溶液对UC-MSCs的影响,其次我们用不同浓度的人AB血清加入到保存液中,观察血清对UC-MSCs的保护作用,最后我们根据血清的成分,在保存液中添加保护性因子,配制一种UC-MSCs的保护液,使保存液对细胞活性的伤害降到最低,为临床UC-MSCs的移植治疗提供实验依据。 目的： 1.评价临床常用的细胞移植保存液对脐带间充质干细胞活性的影响 2.研究不同浓度的人AB血清在UC-MSCs保存过程中对其影响 3.根据血清中的成分,添加细胞的保护性因子,配制成UC-MSCs保护液,提高保存效果。 方法： 1.常用移植保存液对UC-MSCs体外生物学特性影响的研究 将正常环境培养的UC-MSCs重悬于五种保存液中,即0.9%氯化钠注射液,5%葡萄糖注射液,复方电解质注射液(Plasmalyte A),1%人血白蛋白溶液,5%人血白蛋白溶液。在4℃或24℃条件下分别保存2,4,6h,用本文方法观察UC-MSCs在上述溶液中保存后细胞的活性、细胞的凋亡／死亡率、以及细胞保存后细胞的贴壁能力、细胞的表面标记和成骨成脂能力的影响。 2.不同浓度血清对UC-MSCs保存效果的研究 4℃条件下,在0.9%氯化钠注射液加入不同浓度的人AB血清作UC-MSCs的移植保存液,保存6、9、12h。观察UC-MSCs在上述溶液中保存后细胞的活性、细胞的凋亡/死亡率、以及细胞保存后细胞贴壁能力、细胞的表面标记和成骨成脂能力的影响。 3.添加细胞的保护性因子自制成UC-MSCs保护液。 4℃条件,加入各种对细胞有保护作用的细胞因子,自制一种UC-MSCs的保护液,保存6、9、12h。观察UC-MSCs在保护液中细胞的活性、细胞的凋亡/死亡率、以及细胞保存后细胞贴壁能力、细胞的表面标记和成骨成脂能力的影响。 结果： 1.UC-MSCs保存于各种现行临床常用保存液中,细胞活性及细胞的贴壁能力都随时间延长而下降。保存6h,UC-MSCs的活性降至81～53%,细胞贴壁率降至72%-38%。但是细胞的多向分化能力、表面标记检测仍符合UC-MSCs的标准。 2.UC-MSCs保存于不同浓度的血清溶液中,保存6h,2.5%血清浓度中UC-MSCs活性为86%,保存9h,2.5%血清浓度中UC-MSCs活性虽降至78%,但这也远高于不加血清的0.9%氯化钠溶液的保存效果。存活细胞有细胞贴壁能力,多向分化能,表面标记检测符合UC-MSCs的标准。 3.UC-MSCs在自制的保护液中保存6h,细胞活性在90%以上,保存9h,细胞活性仍在88%以上,在保存12h后,细胞活性下降明显,在80%左右,存活细胞仍有贴壁能力、多向分化能力,表面标记检测符合UC-MSCs的标准。 结论： 1.UC-MSCs在临床常用的保存液保存6h,细胞出现大量死亡,细胞活性与贴壁能力下降明显。 2. UC-MSCs保存于不同浓度的血清溶液中,2.5%血清浓度对细胞保护效果明显,由于血清中有许多未知成分,可能对细胞有毒性,细胞的活性随血清浓度的增加而显著下降。 3.自制的细胞保护液能够有效改善UC-MSCs保存后的细胞活性,维持细胞稳定,为临床UC-MSCs的移植治疗提供实验依据。
【关键词】：脐带间充质细胞 移植保存液 细胞保护液 人AB血清
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 英文缩略词表11-12
• 前言12-14
• 第一部分 临床常用保存介质对脐带间充质干细胞生物学特性的影响14-33
• 前言14
• 1.实验材料14-17
• 2.实验方法17-21
• 3.实验结果21-29
• 4.实验讨论29-33
• 第二部分 不同血清浓度的移植保存液对脐带间充质干细胞的影响33-40
• 前言33
• 1.实验材料、主要实验器材与耗材33-34
• 2.实验方法34-35
• 3.实验结果35-38
• 4.实验讨论38-40
• 第三部分 自制脐带间充质干细胞移植保护液的研究40-48
• 前言40-41
• 1.实验材料、主要实验器材与耗材41
• 2.实验方法41-42
• 3.实验结果42-45
• 4.实验讨论45-48
• 参考文献48-58
• 综述58-67
• 参考文献63-67
• 攻读学位期间发表论文情况67-68
• 致谢68-69
• 个人简介69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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本文编号：1066017