鸡胚细胞培养狂犬病病毒工艺的优化

发布时间：2017-10-21 18:31

  本文关键词：鸡胚细胞培养狂犬病病毒工艺的优化

  更多相关文章： 鸡胚细胞 狂犬病病毒 工艺优化 病毒滴度

【摘要】：目的优化鸡胚细胞(chick embryo cells,CECs)培养狂犬病病毒(rabies virus,RV)的工艺。方法以M199为基础培养基,向其分别加入人血白蛋白、胎牛血清及HEPES缓冲液,并均加入碳酸氢钠,配制培养基M1、M2和M3。将驯化获得的CTNCEC25株按1∶5 000的比例接种于CECs悬液中,在不同培养条件下,通过单因素试验初步确定培养基配方、培养温度、接种MOI及培养时间4大工艺参数范围,再以正交试验确定上述条件的最佳组合。结果单因素试验初步确定的工艺参数:采用M2或M3,培养温度为33~36℃,MOI=0.01~0.001 FFU/细胞,培养时间为72~120 h,可获得较高的病毒滴度(7.0 lg FFU/ml以上)。正交试验确定的最佳工艺条件:采用M3,培养温度为33℃,MOI=0.01 FFU/细胞,培养时间为120 h,该工艺参数获得病毒滴度可达7.5 lg FFU/ml。结论本实验优化了CECs培养RV的工艺,CTNCEC25株的病毒滴度由约6.0 lg FFU/ml提高至7.0 lg FFU/ml以上,为疫苗生产获得理想抗原量奠定了基础。
【作者单位】： 深圳市卫光生物制品股份有限公司;
【关键词】： 鸡胚细胞 狂犬病病毒 工艺优化 病毒滴度
【分类号】：R373
【正文快照】： 狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus,RV)引起的病毒性传染病,致死率几乎100%,尚无有效治疗方法,疫苗接种免疫是预防狂犬病的唯一有效途径。目前,人二倍体细胞狂犬病疫苗(human diploid cellrabies vaccine,HDCV)被认为是国际狂犬病疫苗的金标准,但高昂的价格限制了其在发展中

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 王远征;卫江波;张国强;王伟伟;马昱;史雨舟;;狂犬病病毒在鸡胚成纤维细胞上的传代适应性[J];中国生物制品学杂志;2012年06期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 郑日真;刘启录;吴德仁;黄庆楣;黄丽;;狂犬疫苗免疫效果影响因素的logistic回归分析[J];华南预防医学;2014年01期

2 甘海霞;韦显凯;梁晟;郑敏;郑列丰;;广西南宁市免疫控制狂犬病的效果观察[J];广西农学报;2014年02期

3 谢福晓;邱田;;成大速达与瑞必补尔人用狂犬病疫苗四针免疫法安全性比较研究[J];疾病监测与控制;2012年08期

4 亚红祥;王静林;张云智;;云南省狂犬病疫情实验室检测及病毒分子流行病学分析[J];疾病监测;2014年09期

5 刘子维;赵伟;熊欢;王凯;郭举;刘忱;张珩;;超滤截留狂犬疫苗残留DNA的工艺优化和机制探讨[J];军事医学;2014年12期

6 王远征;卫江波;张国强;王伟伟;马昱;史雨舟;;狂犬病病毒在鸡胚成纤维细胞上的传代适应性[J];中国生物制品学杂志;2012年06期

7 崔燕平;何荣;戚凤春;何晓燕;陈坤;任国辉;汤峰;徐琳;周佳丽;;非限制性核酸内切酶对狂犬病疫苗中Vero细胞DNA的去除作用[J];中国生物制品学杂志;2014年04期

8 李露;王化磊;赵国星;齐瑛琳;郑学星;冯娜;赵永坤;王铁成;李忠义;高玉伟;冯烨;杨松涛;夏咸柱;;3株我国狂犬病病毒街毒株在细胞和乳鼠脑内的培养及生长特性[J];中国生物制品学杂志;2014年05期

9 王月;任亮;吴杰;周亦武;郑新雄;解庭波;黄思佳;刘良;王荣帅;屈国强;明平刚;翟珑山;王泽捚;霍玉奇;季雅琦;徐葛林;严家新;;一例人狂犬病病例的病毒分离及鉴定[J];中国生物制品学杂志;2014年03期

10 苗丽;丁丽丽;李春艳;赵博;崔文广;苑志刚;刘岩;杨屹;;食蟹猴肌肉注射冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的长期毒性[J];中国生物制品学杂志;2014年11期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 石磊泰;俞永新;刘景华;曹守春;李加;吴小红;唐建蓉;董关木;;狂犬病病毒减毒株CTN-181的免疫原性研究[A];2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周论文集[C];2012年

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 于福来;狂犬病毒街毒株DRV-AH08基因组序列测定分析及G蛋白免疫原性研究[D];华中农业大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前6条

1 周颂钦;狂犬病病毒街毒株DRV-SX-09犬感染模型的建立[D];华中农业大学;2014年

2 李露;不同宿主来源狂犬病病毒街毒株的增殖特性分析和动物感染特性分析[D];吉林大学;2014年

3 罗扬;狂犬病病毒N和G蛋白多克隆抗体的制备[D];广西大学;2014年

4 汤重发;狂犬病病毒不同毒株的生物学特性和狂犬病暴露后免疫动物模型研究[D];中国食品药品检定研究院;2014年

5 陈继章;新疆狂犬病病毒流行病学调查及基因组和N-G蛋白预测分析[D];新疆农业大学;2014年

6 夏婷婷;狂犬病病毒结构基因的克隆及犬瘟热病毒N蛋白基因与eGFP基因重组质粒的构建[D];新疆农业大学;2014年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 张国强;王远征;王晋;施彤;冯素英;;狂犬病病毒抗原定量检测方法的建立[J];中国生物制品学杂志;2008年11期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李影;段锐;钱爱东;;鹿源狂犬病野毒8202株基因型的研究[J];经济动物学报;2005年04期

2 蔡月琴;马益萍;申会刚;郭军庆;周继勇;;狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中的高效表达[J];中国兽医科学;2007年02期

3 胡志鹏;钟江;;狂犬病病毒研究进展[J];微生物与感染;2007年02期

4 王岩;王宪文;王新卫;;狂犬病病毒分子生物学研究进展[J];安徽农业科学;2007年21期

5 王晓光;侯勇跃;唐青;;狂犬病病毒分子生物学研究进展[J];畜牧与饲料科学;2008年02期

6 王卫华;刘奇峰;;狂犬病病毒分子生物学研究进展[J];山东畜牧兽医;2009年03期

7 江禹;王莉莉;韩小虎;邵明富;范金红;刘芳;涂长春;;动物狂犬病病毒巢式RT-PCR检测方法的建立[J];中国兽医学报;2009年08期

8 郭利;王喜军;冯娜;葛金英;杨松涛;夏咸柱;步志高;;狂犬病病毒Vero ERA株G蛋白333位点精氨酸突变株的构建[J];中国畜牧兽医;2009年09期

9 赵云蛟;钱爱东;;狂犬病病毒全基因组进化研究进展[J];动物医学进展;2009年11期

10 江燕;罗永煌;;抗狂犬病病毒单克隆抗体的研究进展[J];畜牧市场;2010年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 黄福林;;狂犬病病毒的电镜观察及该病的传播[A];第四次全国电子显微学会议论文摘要集[C];1986年

2 胡青海;宋翠萍;丁铲;;狂犬病病毒的结构蛋白研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年

3 魏玉荣;易忠;符子华;马素珍;简子健;王海烽;魏婕;;狂犬病病毒口服疫苗株SRV_9全长基因质粒的构建[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年

4 李海涛;扈荣良;张守峰;肖跃强;袁慧君;涂长春;;狂犬病病毒核蛋白基因重组犬2型腺病毒构建研究[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年

5 潘铁骊;张守峰;扈荣良;;几种理化因子对狂犬病病毒分离株感染力影响的再检测[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年

6 龚文杰;江禹;曾政;李茂;王莉莉;刘浩;熊仲良;涂长春;;动物狂犬病病毒街毒株的细胞分离鉴定[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年

7 张守峰;刘晔;潘铁骊;张菲;扈荣良;;狂犬病病毒街毒株的序列分析及市售疫苗效力研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年

8 朱妍;龚文杰;杨瑞婷;冯烨;涂长春;;狂犬病病毒街毒株准种特性研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年

9 江飙;郑佳琳;张东霞;郭霄峰;;全序列密码子优化对狂犬病病毒基质蛋白原核表达的影响[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年

10 江飙;郑佳琳;张东霞;郭霄峰;;全序列密码子优化对狂犬病病毒基质蛋白原核表达的影响[A];中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会（第三届中国兽药大会学术论坛）论文集[C];2010年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 王君平;快速检测狂犬病病毒技术研发成功[N];人民日报;2006年

中国博士学位论文全文数据库 前9条

1 张建明;福建省狂犬病流行病学及病毒学特征研究[D];福建医科大学;2009年

2 张守峰;狂犬病病毒的RNA干扰研究[D];吉林大学;2007年

3 冯昊;狂犬病病毒、细小病毒病毒样粒子及嵌合细小病毒样粒子的构建、鉴定与实验免疫研究[D];吉林大学;2011年

4 潘铁骊;狂犬病病毒BD06株生物学特性鉴定及反向遗传系统的建立[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年

5 黄莹;狂犬病病毒CTN株反向遗传系统的建立[D];吉林大学;2009年

6 孟胜利;中国流行的狂犬病病毒时空进化分析[D];武汉生物制品研究所;2010年

7 李真光;中和抗体结合MCP-1对狂犬病暴露后预防研究及嵌合糖蛋白重组狂犬病病毒的构建[D];中国农业科学院;2014年

8 薛向红;狂犬病病毒CVS-11株感染性cDNA克隆的构建及其应用[D];吉林大学;2014年

9 焦文强;两株狂犬病病毒全基因组序列测定及aG株反向遗传操作系统的建立[D];中国农业科学院;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 曹亮;抗狂犬病病毒单克隆抗体的制备及应用研究[D];新疆农业大学;2005年

2 黎铭;狂犬病新型口服疫苗—糖蛋白表达质粒的构建以及表达细菌的筛选[D];广西大学;2006年

3 张建;中国狂犬病病毒的分离鉴定及全基因组分子特征研究[D];吉林农业大学;2012年

4 章民;狂犬病病毒L蛋白聚合酶活性部位的原核表达与纯化及多克隆抗体的制备[D];广西大学;2012年

5 王卫华;狂犬病ERA株G基因及其缺失片段表达载体的构建和糖蛋白的表达[D];广西大学;2006年

6 赵雪超;狂犬病病毒基质蛋白的真核表达及其在细胞中的定位[D];天津农学院;2013年

7 王林栋;基于狂犬病病毒Leader序列荧光定量RT-PCR及其应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2014年

8 吴慧;中国狂犬病流行现状及病毒P、M基因遗传进化研究[D];山东大学;2010年

9 焦文涛;2005-2012年中国狂犬病病原检测调查及低发地区病毒N基因分子特征分析[D];吉林农业大学;2013年

10 钱方;用于狂犬病口服免疫的犬2型腺病毒重组载体的相关技术研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2014年

，

本文编号：1074740