SETD4蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒系统的表达

发布时间：2017-10-22 11:03

本文关键词：SETD4蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒系统的表达

【摘要】：目的通过昆虫杆状病毒表达系统表达SETD4(SET domain-containing 4)蛋白,并纯化SETD4蛋白,为深入探讨SETD4的功能奠定基础。方法提取小鼠正常肝组织的RNA,通过RT-PCR扩增SETD4基因,并克隆至p Fast Bac-HTB构建重组载体,再转座获得重组杆粒;通过脂质体介导将重组杆粒转染SF9细胞产生重组病毒,扩增病毒感染细胞并获得重组蛋白;利用Ni2+亲和柱来纯化蛋白,并通过Western Blot及考马斯亮蓝染色鉴定SETD4蛋白。结果经双酶切鉴定及测序证实SETD4基因插入了供体质粒;经PCR鉴定证实SETD4基因插入了穿梭载体;经考马斯亮蓝染色证实纯化得到重组蛋白,用His-Tag抗体和SETD4特异性抗体在50 k D处可检测到目的条带。结论成功利用昆虫杆状病毒表达系统够表达了SETD4,并纯化了SETD4。
【作者单位】：广东省蛋白质组学重点实验室南方医科大学基础医学院病理生理学教研室;
【关键词】： SETD蛋白 杆状病毒表达系统 表达纯化
【基金】：国家自然科学基金(81072425,81272149)
【分类号】：Q939.4;R3416
【正文快照】： SET家族蛋白是在14年前由Stephen等人首次发现的,这一家族成员在酵母及动、植物细胞中广泛存在,其共同特征之一是含有一个高度保守的SET结构域[1,2]。越来越多的证据表明,SET家族蛋白具有组蛋白及非组蛋白甲基化转移酶的功能,能够调控基因表达,参与基因转录抑制及异染色体沉寂

【参考文献】

中国期刊全文数据库前2条

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【共引文献】

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