结核分枝杆菌生物膜形成相关基因的筛选与鉴定

发布时间：2017-10-22 15:27

  本文关键词：结核分枝杆菌生物膜形成相关基因的筛选与鉴定

  更多相关文章： 结核分枝杆菌 MycoMarT7噬菌体转座子 菌落形态 生物膜

【摘要】：目的通过菌落表型变化并结合生物膜生长缺陷筛选并鉴定可能与结核分枝杆菌生物膜形成相关基因。 方法利用带有Himar1转座子的MycoMarT7转座子系统建立结核分枝杆菌H37Ra随机插入突变库；筛选细菌表面结构发生变化和生物膜形成有变化的突变菌株；运用T-A克隆法并结合抗性标记挽救法获得突变菌株的随机插入基因侧翼序列，使用通用引物M13F和M13R进行测序，将测序结果与结核分枝杆菌H37Ra全基因组序列进行比对，并分析判断从而鉴定转座子插入位点。并运用生物信息学方法分析预测突变基因的功能，进而鉴定出与菌落形态或者生物膜形成相关基因。 结果成功构建库容量约为1×104结核分枝杆菌转座子随机插入突变文库。通过菌落形态变化及生物膜缺陷表型筛选出39株突变株，成功鉴定出插入位点的突变菌株有16株，涉及16个基因发生突变，与野生株相比，其中8株成膜能力未发生任何变化，在20~25d即可形成生物膜，而编号P7C8的突变株为生物膜完全缺陷株，细菌培养观察至7周时间，依然未见生物膜形成表型；其余7株均出现生物膜生长或成熟延迟情况，其中2株成膜时间为30d时在气液界面才出现薄膜样，5株在40d左右才开始在气液表面形成肉眼可见的薄膜层。运用生物信息学方法预测，16个发生突变的基因中5个与脂质代谢相关，4个与细胞壁合成相关、2个与中间代谢和呼吸作用相关、1个调节蛋白相关基因，1个毒力相关基因，1个PE/PPE家族基因，还有2个功能未知基因。结合生物膜形成缺陷分析，其中8个基因可能与H37Ra体外生物膜的形成相关。 结论本研究以结核分枝杆菌H37Ra菌株为研究对象，成功构建库容量约为1×104结核分枝杆菌转座子随机插入突变文库。以菌落形态变化及生物膜缺陷表型为切入点，筛选获得生物膜生长受损突变株及可能与结核分枝杆菌生物膜形成相关的基因信息，，为结核分枝杆菌生物膜形成相关基因的分离鉴定提供新方法，同时为研究其致病机制及生物膜形成调控机制提供候选基因，为后续深入开展生物膜形成机制研究奠定基础。
【关键词】：结核分枝杆菌 MycoMarT7噬菌体转座子 菌落形态 生物膜
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R378.911
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 中英文缩略词表8-11
• 前言11-14
• 材料与方法14-36
• 结果36-43
• 讨论43-46
• 全文总结46-47
• 参考文献47-50
• 综述50-59
• 综述参考文献56-59
• 致谢59-60
• 攻读硕士研究生期间发表的文章60-61
• 个人简历61

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 郑霏琴,杨蕴刘,王宗阳,洪孟民;转座子Tn4、Tn3与Tn233(CH)之间转座功能互补与转座免疫的研究[J];遗传学报;1985年05期

2 丛延广,徐启旺;利用Mini-Tn5转座子诱导弗氏枸橼酸杆菌插入突变的研究[J];第三军医大学学报;2004年13期

3 赵旺胜;顾兵;刘爱民;唐芹芳;杨鹏云;文怡;刘根焰;;肠球菌耐药性与转座子Tn916/1545的关系探讨[J];江苏医药;2007年11期

4 林宁;孙海平;;多药耐药大肠埃希菌整合子、转座子遗传标志研究[J];中华医院感染学杂志;2008年10期

5 苏兆亮;糜祖煌;孙光明;陈建国;郑东;刘嫣方;Sandoghchian Siamak;许化溪;;多药耐药鲍氏不动杆菌耐药性与转座子及插入序列遗传标记研究[J];中华医院感染学杂志;2010年20期

6 许亚丰;王春新;陈国千;耿先龙;赵琪;周丽珍;糜祖煌;;泛耐药鲍氏不动杆菌携带多种转座子与插入序列[J];中华医院感染学杂志;2011年13期

7 万海英;汤华;;基因敲除技术现状及应用[J];医学分子生物学杂志;2007年01期

8 糜家睿;黄支密;糜祖煌;;大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌traA、tnp513基因研究[J];中华医院感染学杂志;2010年03期

9 韩素贞;周俊初;陈华葵;;Tn5-Mob转座系统对紫云英根瘤菌SR72的诱变和诱动作用[J];中国微生态学杂志;1990年01期

10 刘克义,于进芝;利用果蝇转座子作载体构建土垢分枝杆菌变异基因文库的研究(英文)[J];中国寄生虫病防治杂志;2004年06期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 戴广明;曹以诚;杜正平;陈洵;黄曙海;逄宇;周杨;黄海荣;赵雁林;;结核分枝杆菌环介导恒温扩增(LAMP)快速检测方法的构建[A];中华医学会结核病学分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年

2 许优;孙惠平;张增贤;刘莉娜;;关于结核分枝杆菌定量方法的研究[A];中华医学会结核病学分会2006年学术会议论文汇编[C];2006年

3 刘毅;李卫民;田苗;孙照刚;李传友;周辉;张治国;高铁杰;高峰;;快速筛选定义北京基因型结核分枝杆菌的新方法[A];2007年中国防痨协会全国学术会议论文集[C];2007年

4 张月新;辛毅;马郁芳;;结核分枝杆菌RmlB的表达、纯化及酶促反应动力学研究[A];2008年全国糖生物学学术会议论文摘要[C];2008年

5 刘焰;刘胜武;谈蓉;马立新;刘君炎;;结核分枝杆菌Ag85B与ESAT-6双顺反子重组腺表达载体的构建[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

6 吴园;钟敏;王易伟;钟静;胡频频;毛旭虎;;Rv0341用于诊断依赖利福平结核分枝杆菌结核病的研究概况[A];中国防痨协会临床委员会、中国防痨协会基础委员会学术研讨会论文集[C];2008年

7 张旭霞;张海青;李传友;田苗;赵冰;李卫民;张健源;印云青;焦扬;端木宏谨;;结核分枝杆菌黏附素HBHA防治结核病的动物实验研究[A];2005年中国防痨协会全国学术会议论文集[C];2005年

8 陈曦;张宗德;刘忠泉;贾红彦;邢爱英;古书香;;结核分枝杆菌rv3873、rv3879c基因原核表达载体的构建和表达[A];中华医学会结核病学分会2006年学术会议论文汇编[C];2006年

9 周庆;方中飞;沈小英;宋冰;方孝美;;临床分离结核分枝杆菌的耐药性分析[A];2006年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2006年

10 陈涛;周琳;周杰;江勇;周志刚;彭建明;文力;彭东东;何超文;钟球;;环介导等温扩增法快速检测结核分枝杆菌的方法建立与临床应用评估[A];中华医学会结核病学分会2011年学术会议论文汇编[C];2011年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 冯卫东;转座子荣居自然界最丰富基因榜首位[N];科技日报;2010年

2 本报记者 冯卫东;遗传基因中的“侵略者”[N];科技日报;2008年

3 记者 韩晓玲　通讯员 范敬群 金安江;华中农大研究成果获世界声誉[N];湖北日报;2009年

4 程光胜、戴秀玉;缘悭一面廿五年[N];科技日报;2005年

5 廖宝红 记者　 刘廉君;植物核基因水平转移分子证据被发现[N];科技日报;2006年

6 主持人：彭电子 中国畜牧报专刊部主任，《东方畜牧周刊》常务副主编;为安全，饲用抗生素前景黯淡[N];中国畜牧报;2002年

7 孙迎基 编译;让新药研发随心所欲[N];医药经济报;2002年

8 庄愉;新型抗结核疫苗的开发研究[N];中国医药报;2002年

9 郑灵巧;猪链球菌7型对四环素耐药[N];健康报;2008年

10 朴淑瑜;科学家找到大麦白粉病“元凶”[N];科技日报;2010年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 王锦;水牛乳腺基因表达谱与生长激素转基因水牛的初步研究[D];广西大学;2013年

2 韩民锦;家蚕MITE转座子的鉴定、进化和功能以及家蚕转座子的进化动力学研究[D];西南大学;2013年

3 张欣城;metK对那西肽生物合成的影响和链霉菌高效转座系统的构建[D];复旦大学;2009年

4 李思圆;激光辐射诱导水稻发生可遗传DNA甲基化变异和转座子激活及其可能机制研究[D];东北师范大学;2011年

5 韩乃君;转座子介导的伪狂犬病毒重组狂犬病疫苗构建与免疫研究[D];吉林大学;2012年

6 钱叶雄;低能离子诱导玉米Mu转座子激活及DNA甲基化表观遗传机制的研究[D];安徽农业大学;2011年

7 白丁平;PiggyBac转座子介导的转E.coli半胱氨酸合成酶基因绒山羊研究[D];西北农林科技大学;2012年

8 韩延超;Tol2转座子介导的斑马鱼诱变及Grhl2对内耳发育的调控[D];清华大学;2012年

9 徐广宇;基于生物信息学的结核分枝杆菌分子流行病学调查及诊断靶标簇系统平台的建立[D];吉林大学;2013年

10 张森;利用转座子系统定向突变拟南芥基因以及拟南芥FA121和FA254两基因功能的研究[D];中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）;2004年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 刘霞;结核分枝杆菌生物膜形成相关基因的筛选与鉴定[D];宁夏医科大学;2013年

2 黄春;新疆地区结核分枝杆菌临床分离株致病相关基因的筛选[D];石河子大学;2007年

3 彭玲;植物内生生防蜡样芽孢杆菌0-9菌株转座子插入突变体库的建立及评价[D];河南大学;2011年

4 田海霞;基于PCR方法检测转座子对拟南芥基因进化的适应性研究[D];东北农业大学;2011年

5 蔡溢;结核分枝杆菌RmlA的表达、纯化以及酶促反应动力学研究[D];大连医科大学;2006年

6 王霞芳;IFN-γ增强BALB/c小鼠对结核分枝杆菌感染的抵抗力[D];苏州大学;2002年

7 曹立雪;应用膜芯片检测结核分枝杆菌rpoB基因突变[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年

8 韩喜琴;噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌药物敏感性研究及评价[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2004年

9 王琳;结核分枝杆菌ClpX和ClpP2蛋白酶的克隆表达及其性质研究[D];西南大学;2010年

10 丁卫民;耐多药肺结核与结核分枝杆菌L型感染的临床研究[D];山西医科大学;2003年

本文编号：1078975