IGF-1基因转染对脂肪间充质干细胞生物活性的影响

发布时间：2017-10-23 13:02

  本文关键词：IGF-1基因转染对脂肪间充质干细胞生物活性的影响

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【摘要】：研究背景和目的： 背景： 间充质干细胞作为一种具有自我更新和多向分化潜能的细胞已经广泛应用于基础研究和临床实验,其在细胞治疗领域展现了良好的前景。而脂肪间充质干细胞（adipose tissue-derived mesenchymal stem cell，ADMSCs）由于具有来源广泛，，取材方便，体外可大量扩增等优点而越来越被大家所接受。但是干细胞移植仍然面临许多问题，其中之一为植入细胞滞留率和存活率低下。目前有许多手段可用于提高干细胞的活性及移植效应，包括移植前预处理、改变移植途径、基因修饰等。其中基因修饰引起了人们的兴趣,通过促进或抑制基因的表达进一步提高干细胞的治疗作用。然而可用于基因修饰的基因以及介导载体种类繁多，因此选择合适的基因以及携带基因的载体成为了提高干细胞移植效应亟待解决的问题。 目的： 研究IGF-1基因转染对ADMSCs生物活性的影响，并对其凋亡机制做初步研究。旨在为提高ADMSCs的活力和治疗效果，并最终应用于临床提供实验依据。 方法： 分离、培养并鉴定ADMSCs,用携带IGF-1基因的慢病毒载体感染ADMSCs。实验分为ADMSCs，ADMSCs-GFP，ADMSCs-IGF三组，于病毒感染后四天收集细胞上清液和蛋白，行ELISA和Western-blot,测定各组中上清液IGF-1的分泌情况以及蛋白中Akt和P-Akt的表达。用MTT法测定各组细胞的生长情况并绘制生长曲线，用annexin-V测定各组细胞凋亡。 结果： 成功分离、培养了大鼠ADMSCs，表型鉴定CD31、CD34、CD45表达阴性，CD29及CD90表达阳性。ADMSCs经过诱导可以向骨，脂肪和心肌细胞分化。IGF慢病毒表达载体感染脂肪间充质干细胞，荧光显微镜下观察到持续表达的绿色荧光。ADMSCs-GFP和ADMSCs-IGF组的凋亡率明显高于ADMSCs组，而ADMSCs-GFP与ADMSCs-IGF相比，前者的凋亡率要高于后者。MTT法显示ADMSCs-IGF可以促进细胞生长，在第5,6天时显著高于其他俩组。ADMSCs可以通过旁分泌的形式分泌IGF-1，而ADMSCs-IGF组进一步促进了IGF-1的分泌，并且与时间成正相关。AKT在三组均表达但无统计学差异，但ADMSCs-IGF促进了P-Akt的表达水平，与其他组相比具有显著性差异。 结论： 1.成功分离培养了ADMSCs，并用IGF-1慢病毒载体成功转染ADMSCs； 2.IGF-1基因修饰ADMSCs可以使IGF-1持续稳定分泌，并且ADMSCs可以通过、分泌的形式分泌IGF-1; 3.IGF-1基因修饰ADMSCs可以促进细胞生长抑制细胞凋亡; 4.IGF-1基因修饰ADMSCs抑制干细胞凋亡可能是通过激活PI3K/Akt通路
【关键词】：脂肪间充质干细胞 慢病毒载体 IGF-1 PI3K/Akt通路
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2;R450
【目录】：

• 缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-14
• 参考文献12-14
• 第一部分 大鼠来源的脂肪间充质干细胞的分离、培养及鉴定14-24
• 材料14-16
• 方法16-17
• 结果17-20
• 讨论20-21
• 结论21-22
• 参考文献22-24
• 第二部分 IGF-1 基因转染对脂肪间充质干细胞生物活性的影响24-45
• 材料25-27
• 方法27-30
• 结果30-37
• 讨论37-40
• 结论40-41
• 参考文献41-45
• 逆转录病毒类载体在基因治疗中的发展和应用45-50
• 参考文献48-50
• MSCs 的生物学特征及在心血管疾病中的应用进展50-62
• 参考文献58-62
• 攻读硕士期间发表论文62-63
• 致谢63-64

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

1 王毅,胡志前,徐学俊,王元和,王强,孔宪涛;逆转录病毒介导的HSV-TK基因系统对人胃癌细胞的转染及杀伤作用[J];第二军医大学学报;2001年04期

2 王红卫,薛京伦;VSV-G假型反转录病毒载体在基因治疗中的应用[J];国外医学.遗传学分册;2001年01期

3 胡成俊;卓儒红;郑勇;吴艳;;转染胰岛素样生长因子-1的骨髓基质细胞对心肌梗死后心功能的影响[J];武汉大学学报(医学版);2009年04期

4 徐道华;周晨慧;刘钰瑜;许碧莲;;大鼠骨髓间充质干细胞分化成脂肪细胞的定向诱导[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年01期

5 张美;吕国枫;;骨髓间充质干细胞向软骨的诱导分化[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年45期

6 唐东杰,代解杰,陈元鼎,董德祥;泡沫病毒的研究进展[J];中国实验动物学杂志;1999年01期

7 王轩 ,刘福坤 ,黎介寿 ,李希 ,徐根兴;逆转录病毒介导的人endostatin基因疗法抗肿瘤作用研究(英文)[J];Chinese Medical Journal;2002年11期

8 程芮;王士雯;张友荣;孟玲;曹丰;徐勇;王韫芳;裴雪涛;;3种不同途径移植自体骨髓间充质干细胞治疗急性心肌梗死效果比较[J];中华实验外科杂志;2005年12期

9 邓进;彭吾训;王蕾;李鹏;;骨髓间充质干细胞二维培养条件下向软骨细胞诱导分化的实验研究[J];中国现代医学杂志;2008年16期

本文编号：1083505