抗人肌红蛋白单克隆抗体的制备及应用

发布时间：2017-10-23 17:14

  本文关键词：抗人肌红蛋白单克隆抗体的制备及应用

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【摘要】：目的制备高效价、高特异性的抗人肌红蛋白(MYO)单克隆抗体(m Ab),建立ELISA双抗体夹心法检测人血清中MYO。方法用天然的MYO进行免疫,用杂交瘤技术获得稳定分泌抗人MYO m Ab的细胞株;制备腹水型m Ab,经亲和纯化后进行抗体特性鉴定;确定最佳配对组合并建立双抗体夹心ELISA一步法,对血清样本进行检测,并与进口试剂盒进行比较。结果共筛选出9株能稳定分泌m Ab的细胞株,其中2M1、3M4、5M7、10M4亲和纯化后效价达到(1.0~2.6)×106(A450约为1.0时的抗体稀释倍数)。抗体配对共筛选出3对能进行夹心配对的抗体(2M1/HRP-3M4、5M7/HRP-3M4、10M4/HRP-5M7),其中5M7/HRP-3M4这个配对有较高的灵敏度和较大的线性范围;利用最佳配对组合5M7/HRP-3M4建立标准曲线,其线性范围为(25~1000)ng/m L,优于进口试剂盒的线性范围(25~500)ng/m L;样本检测结果显示,自制试剂盒的阳性检出率为95%(19/20),阴性检出率为100%(40/40)。结论获得了2株高特异性,高亲和力的抗人MYO m Ab,建立了双抗体夹心ELISA一步法,为ELISA试剂盒的研制奠定了基础。
【作者单位】： 暨南大学抗体工程中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州市疾病与食品安全免疫学快速检测企业重点实验室暨南大学分室;
【关键词】： 人肌红蛋白 细胞融合 单克隆抗体 ELISA双抗体夹心法
【基金】：广东省战略新兴产业核心技术攻关项目(2012A080800007) 广东省产学研项目(2010B090400426)
【分类号】：R392
【正文快照】： 杨全利,刘诗琴,谈思怡,邵晨晨,黄建芳,向军俭*(暨南大学抗体工程中心,广东省分子免疫与抗体工程重点实验室,广州市疾病与食品安全免疫学快速检测企业重点实验室暨南大学分室,广东广州510632逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄

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【共引文献】

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本文编号：1084488