过表达缺氧诱导因子-1α的结直肠癌裸鼠可视化模型的建立

发布时间：2017-10-24 02:23

  本文关键词：过表达缺氧诱导因子-1α的结直肠癌裸鼠可视化模型的建立

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【摘要】：目的:建立一种荧光可视化显像且稳定过表达缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的裸鼠结直肠癌移植瘤模型。方法:对不同的人结直癌细胞系(SW480、SW620、LOVO及HCT116细胞)用缺氧诱导剂Co Cl2处理,根据HIF-1α被诱导表达的情况选择合适的靶细胞;将HIF-1α的c DNA序列克隆至慢病毒表达质粒p LV-TRC-EGFP,构建p LVHIF1α-EGFP慢病毒表达质粒,并包装过表达HIF-1α的慢病毒颗粒Lenti-HIF1α-EGFP。将Lenti-HIF1α-EGFP感染SW480细胞,嘌呤霉素筛选稳定过表达HIF-1α的细胞株SW480HIF-1α,Western blotting检测SW480HIF-1α细胞内HIF-1α及其下游蛋白VEGF、M1型丙酮酸激酶(pyruvate kinase expression M1,PKM1)的表达情况,Transwell实验检测其迁移能力。裸鼠腹腔注射SW480HIF-1α建立结直肠癌移植瘤模型,倒置荧光显微镜观察裸鼠腹腔移植瘤结节。结果:常氧条件下4种结直肠癌细胞均不表达HIF-1α,经Co Cl2诱导后,除SW480细胞系以外的细胞均可被诱导表达HIF-1α,故选择SW480细胞作为研究靶细胞。成功构建稳定过表达HIF-1α的细胞株SW480HIF-1α,SW480HIF-1α细胞内HIF-1α、VEGF和PKM1的表达水平均高于野生型SW480细胞,其迁移能力较野生型SW480细胞显著增强[观察视野内迁移细胞数:(250±11)vs(50±5)个,P0.01]。SW480HIF-1α组裸鼠肠壁形成肿瘤结节数量显著多于SW480组[(15±4)vs(4±1)个,P0.05]。结论:成功建立了高表达HIF-1α的荧光可视化裸鼠移植瘤模型,为进一步的相关功能学研究以及药物筛选提供条件。
【作者单位】： 同济大学附属第十人民医院甲状腺乳腺外科;宁波市医学科学研究所药物与药理研究室;第二军医大学生物化学与分子生物学教研室;上海中医药大学附属普陀中心医院普通外科;
【关键词】： 结直肠癌 移植瘤模型 稳定转染 慢病毒 缺氧诱导因子-α 绿色荧光蛋白
【基金】：上海市科学技术委员会专项基金资助项目(No.12140902302)~~
【分类号】：R735.34;R-332
【正文快照】： [Chin J Cancer Biother,2015,22(2):246-251]结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是常见的消化道恶性肿瘤,世界范围内其平均发病率居男性第3位、女性第2位。在北美、新西兰、西欧和日本(男性)等经济发达地区其发病率高居第1、2位,我国结直肠癌发病率也呈现逐年上升的趋势,是临床

【共引文献】

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本文编号：1086592