聚凝胺增强Ror2重组腺病毒感染K562细胞效应的研究

发布时间：2017-10-24 07:43

  本文关键词：聚凝胺增强Ror2重组腺病毒感染K562细胞效应的研究

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【摘要】：目的探索应用聚凝胺(polybrene)试剂增强Ror2重组腺病毒对K562细胞转染效率的技术。方法在K562细胞中分别加入0~12μl Ror2重组腺病毒,摸索最佳重组腺病毒用量;同时加入0~5μg/ml polybrene和最佳重组腺病毒用量,培养1~3d后,在荧光显微镜下计数,对比加入polybrene前后被感染的细胞数。台盼蓝染色观察重组腺病毒引起K562细胞死亡的情况。采用RT-PCR和Western blotting检测Ror2基因的表达情况。结果 Polybrene浓度为3μg/ml和重组腺病毒8μl时,感染效果最佳,对细胞生长影响较小,实验组感染效果是对照组的17倍;加入polybrene后,外源性Ror2m RNA和蛋白表达水平均明显增高。结论 Polybrene能显著增强重组腺病毒感染K562细胞的作用,并能高效表达外源性Ror2基因,该法简便、价廉、有效,是血液疾病分子生物学研究的一个良好策略。
【作者单位】： 第三军医大学西南医院临床血液学教研室;
【关键词】： 聚凝胺 腺病毒科 K细胞 基因 ror
【基金】：国家自然科学基金面上项目(81370624)~~
【分类号】：R373
【正文快照】： 入效率高,被广泛采用。生物学方法通常采用病毒作为基因载体,如反转录病毒、慢病毒和腺病毒载体。慢病毒和反转录病毒导入的基因可整合到细胞的基因组序列中,所以有潜在致病风险,且导入细胞的拷贝数不高,基因表达变化不明显,且不易感染终末期或增殖慢的细胞,制备也相对烦琐。

【参考文献】

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本文编号：1087786