大鼠肾组织干细胞的分离培养与鉴定

发布时间：2017-10-25 02:19

  本文关键词：大鼠肾组织干细胞的分离培养与鉴定

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【摘要】：目的分离培养及稳定扩增大鼠肾组织干细胞(kidney stem cell,KSC),并鉴定其生物学特征及干细胞特性。方法从4周龄雄性SD大鼠双肾肾乳头处分离培养KSC,倒置显微镜下观察细胞形态特征,通过流式细胞、免疫荧光技术鉴定KSC的表型特征,通过成骨、成脂诱导分化鉴定其分化能力,并通过实时定量荧光PCR(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)比较KSC与大鼠肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cell,RTEC)基因表达的差异。结果 KSC呈纺锤形或树枝状生长;免疫荧光结果显示KSC可表达平滑肌肌动蛋白(alpha-sooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)、神经钙粘蛋白(N-Cadherin)、神经巢蛋白(Nestin)、CD133,不表达钙粘蛋白-E(E-Cadherin)、细胞角蛋白(cytokeratin-18,CK-18)、紧密连接蛋白(zona occludens protein-1,ZO-1);细胞流式结果显示,CD29、CD90、CD73表达比率分别为99.0%、95.8%和99.9%,CD45阳性率为3.4%;干细胞标记CD133和Nestin阳性率分别为33.2%和70.2%,双阳性率为31.4%;成脂诱导后油红O染色呈红色,成骨诱导后早期成骨细胞分化标志茜素红染色呈橙红色;qRT-PCR结果显示,与RTEC相比,原始胚胎干细胞标记物Nanog、Oct4/pou5f1、Sox2/sry-box-2的mRNA表达量在KSC中增高(P0.01),间质标记物α-SMA、Vimentin mRNA表达量在KSC中增高(P0.01),而成熟的上皮细胞标记物E-Cadherin、CK18mRNA表达量在KSC中降低(P0.01)。结论肾乳头部位可以分离培养并稳定扩增出具有间充质干细胞特性的KSC。
【作者单位】： 解放军总医院南楼肾脏病科肾脏疾病国家重点实验室;军事医学科学院干细胞与再生医学实验室;
【关键词】： 肾组织干细胞 分离培养 肾乳头 大鼠
【基金】：国家自然科学基金(No.81170312;No.30772296) 北京市自然科学基金(No.7122163) 解放军总医院扶持基金(No.2012FCCXYY-4005)资助
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 干细胞广泛存在于人体各个组织脏器中,如大脑、肠道、肝脏、皮肤等均发现有干细胞存在[1-4],这些干细胞被称为组织特异性干细胞,肾脏中也同样存在这一类干细胞,2004年Oliver等[5]首次提出肾组织干细胞(kidney stem cell,KSC)存在于肾乳头的干细胞壁龛中,并证实了存在于此处的K

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本文编号：1091633