登革热抗体依赖性感染增强（ADE）的机制研究

发布时间：2017-10-25 04:13

  本文关键词：登革热抗体依赖性感染增强（ADE）的机制研究

  更多相关文章： 登革热 抗体依赖性感染增强作用(ADE) 差异蛋白质组学 RNA干扰

【摘要】：目的：研究异型登革热病毒(DENV)-抗体复合物感染K562细胞所产生的抗体依赖感染增强作用(ADE)机制。方法：将梯度稀释的II型登革热膜前蛋白抗-PrM单克隆抗体与Ⅲ型登革热病毒(MOI=3)于37℃,5%C02培养箱内孵育90min形成抗体-病毒复合物后感染K562细胞,通过间接免疫荧光染色,Real-Time PCR检测DENV抗原在细胞内的表达增强,然后通过蛋白组学技术发现ADE过程中K562细胞蛋白表达的差异,并通过G-O软件对差异蛋白进行归类分析揭示其亚细胞定位和分子功能。然后选择差异显著的蛋白进行Western Blot验证其在转录水平的表达增强,最后通过RNA干扰,Real-Time PCR研究该蛋白能否降低ADE过程中登革热病毒的表达量。结果：抗体依赖增强作用(ADE)的效果取决于抗体浓度。稀释度为1/2560的抗体与DENV结合共同感染K562后,细胞内登革热病毒抗原的免疫荧光染色结果有明显增强,Real-Time PCR检测的结果也证实了该稀释度的抗体病毒复合物感染K562细胞后登革热病毒数量显著增加。2-D及质谱分析结果发现ADE过程中有15个表达差异显著的蛋白,GO分类分析发现差异蛋白主要与蛋白折叠,细胞骨架结构,肌动蛋白微丝进程,调节ATP酶的活性,调节横纹肌,心肌收缩等生物过程相关。其中PFDN1和MYL3蛋白的表达明显增强, Western Blot结果也证实了这一点。最后选择RNA干扰PFDN1蛋白的表达,Real-Time PCR检测的结果显示干扰PFDN1的表达后在ADE过程中登革热病毒量明显降低。结论：成功建立了登革热病毒的抗体依赖感染增强作用的体外研究模型,发现了ADE过程中病毒表达增强相关的蛋白,为进一步的ADE作用机制的研究及疫苗研发提供理论基础。
【关键词】：登革热 抗体依赖性感染增强作用(ADE) 差异蛋白质组学 RNA干扰
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 前言6-14
• (一) 登革热病毒概况6-9
• (二) 登革热ADE简介9-10
• (三) 登革热疫苗研究进展10-12
• (四) 全球登革热流行统计12-13
• (五) 课题研究目的及意义13-14
• 一、实验材料与方法14-30
• (一) 实验材料14-17
• (二) 实验方法17-30
• 二、实验结果30-40
• 1. 病毒滴度CCID50测定30
• 2. 病毒感染细胞的免疫荧光染色30
• 3. 体外ADE的间接免疫荧光染色结果30-31
• 4. Real-Time PCR31-32
• 5. 二维凝胶电泳结果32
• 6. 质谱分析结果32-33
• 7. 差异蛋白质的GO注释和分析33-37
• 8. Western Blot37-38
• 9. RNA干扰PFDN1在K562细胞中的表达38-39
• 10. PFDN1干扰后登革热病毒量的表达39-40
• 11. CCID 50值验证siRNA干扰后ADE效果40
• 三、讨论40-44
• 小结展望44-45
• 参考文献45-50
• 附录Ⅰ 缩略词50-51
• 附录Ⅱ 溶液配制51-53
• 致谢53-54
• 个人简介54
• 研究生期间参与的课题54-55
• 已发表的文章55-56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 郭汝宁;何剑峰;梁文佳;钟豪杰;杨芬;张锦清;;2005—2010年广东省登革热境外输入病例流行特征分析[J];华南预防医学;2011年05期

2 何利娜;王升启;;登革病毒抑制剂的研究进展[J];国际药学研究杂志;2013年01期

3 彭文伟;;登革热[J];广西医学;1981年03期

4 吴冰珊;严延生;;登革热发病机制的研究进展[J];海峡预防医学杂志;2009年04期

5 朱玉兰;王佃鹏;甄胜西;黄宗炎;刘胜牙;高朝贤;;登革热病毒RNA实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J];热带医学杂志;2009年11期

，

本文编号：1092014