人类FcRn跨肠粘膜传递兔抗体的研究

发布时间：2017-10-25 14:21

  本文关键词：人类FcRn跨肠粘膜传递兔抗体的研究

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【摘要】：免疫乳中不仅含有基本的营养物质，而且还含有丰富的免疫球蛋白，尤其是免疫球蛋白G，对于哺乳动物而言，母源IgG能够跨过胎盘屏障、上皮屏障传递给胎儿和婴幼儿，从而使其获得抵御各种疾病感染的能力，而这一过程需要新生儿Fc受体（FcRn)的参与。另外，IgG的Fc端能够和多种先天免疫细胞（如巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、NK细胞等）上的Fc受体结合发挥免疫作用。 由于本实验室的前期研究已经证明家兔的IgG和人类FcRn的亲和力最强，甚至超过人类自己的IgG，所以本研究选择牛IgG作为抗原，对兔子进行免疫，制备兔抗牛多克隆抗体IgG，主要以青年健康志愿者为研究对象，通过口服异源抗体，，利用补体结合试验检测异源抗体能否跨肠黏膜传递。另外，实验还通过流式细胞仪以及紫外荧光显微镜对实验结果做了进一步的验证。 补体结合试验检测结果，血清实验组比对照组有较为显著差异（P=0.0150.05)，同时，白细胞实验组比对照组也有显著差异（P=0.0270.05)，这些数据表明在受试者的血清及白细胞上均存在兔抗牛IgG，即异源抗体能够跨肠粘膜转运而进入到血液循环中，并能够和白细胞上的Fc受体结合。21天后，为追踪异源抗体在体内存在的半衰期，对受试者的血液再一次进行了分析，结果表明，血清实验组较对照组已无显著差异（P=0.0730.05)，而白细胞实验组较对照组仍有显著差异（P=0.0440.05)。也就是说，受试者的血清中已不存在兔抗牛IgG，但在白细胞上仍然检测到了兔抗牛IgG的存在。为进一步证明该结论，实验选择FITC标记的抗原与被检血液进行孵育反应，利用流式细胞仪监测分析以及荧光显微镜观察，二者均检测到了荧光信号的存在，这些都表明异源抗体不仅能够跨肠粘膜传递，而且能够在机体内存留较长时间。这些实验结果将为免疫乳以及婴幼儿奶粉中添加异源IgG能否被吸收提供依据，也将为异源抗体用于疾病和肿瘤治疗提供一条新的途径。
【关键词】：牛IgG 兔抗牛IgG FcRn Fc受体 补体结合试验 荧光信号
【学位授予单位】：天津商业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 第一章 前言8-20
• 1.1 引言8-12
• 1.1.1 免疫乳的概述及发展8
• 1.1.2 特异性免疫球蛋白8-10
• 1.1.3 免疫球蛋白 Fc 受体10-12
• 1.2 新生儿免疫球蛋白 Fc 受体(neonatal Fc receptor,FcRn)12-17
• 1.2.1 FcRn 与 IgG 的相互作用14-16
• 1.2.2 IgG 的跨肠粘膜传递16-17
• 1.3 FcRn 母婴和母子之间的免疫传递17-19
• 1.4 课题研究的依据和意义19-20
• 1.4.1 课题选择的依据19
• 1.4.2 课题研究的意义19-20
• 第二章 材料与方法20-37
• 2.1 提取单克隆抗体牛 IgG20-22
• 2.1.1 实验原料20
• 2.1.2 主要实验试剂20
• 2.1.3 实验仪器20-21
• 2.1.4 实验方法21-22
• 2.2 醋酸纤维膜电泳鉴定牛 IgG 纯度22-24
• 2.2.1 实验试剂22
• 2.2.2 实验器材22
• 2.2.3 实验方法22-24
• 2.3 制备多克隆抗体兔抗牛 IgG24-25
• 2.3.1 实验药品及仪器24
• 2.3.2 实验动物24
• 2.3.3 免疫方法24-25
• 2.4 双向免疫扩散法测定抗血清效价25-26
• 2.4.1 实验原理25
• 2.4.2 实验仪器和试剂25
• 2.4.3 方法25-26
• 2.5 IgG 的跨肠黏膜传递26-37
• 2.5.1 实验试剂26-27
• 2.5.2 实验仪器27
• 2.5.3 实验对象及方案27
• 2.5.4 血液预处理27-28
• 2.5.5 利用补体结合试验研究 IgG 的跨肠黏膜传递28-31
• 2.5.6 补体结合预实验31-34
• 2.5.7 补体结合试验正式实验34-35
• 2.5.8 流式细胞仪检测荧光信号35-36
• 2.5.9 荧光显微镜下观察荧光信号36-37
• 第三章 结果与分析37-49
• 3.1 免疫球蛋白牛 IgG 醋酸纤维膜电泳37
• 3.2 兔抗牛 IgG 抗血清效价测定37-38
• 3.3 补体结合试验结果38-46
• 3.3.1 溶血素的效价38-39
• 3.3.2 补体的效价39-40
• 3.3.3 正式实验结果40-46
• 3.4 流式细胞仪检测结果46-48
• 3.5 荧光显微镜下观察荧光信号图片48-49
• 第四章 结论49-51
• 4.1 IgG 的跨肠黏膜传递49
• 4.2 论文创新点49-50
• 4.3 尚存在的问题及进一步设想50-51
• 参考文献51-56
• 发表论文及参加科研情况56-57
• 致谢57-58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：1094101