TEA阻断BKCa离子通道对血管平滑肌细胞增殖的影响及机制的研究

发布时间：2017-10-27 12:08

  本文关键词：TEA阻断BKCa离子通道对血管平滑肌细胞增殖的影响及机制的研究

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【摘要】：目的： 观察TEA阻断BKCa离子通道后对体外培养兔主动脉血管平滑肌细胞增殖以及Ras-Raf-MEK-ERK/MAPK信号途径的影响。 方法： 体外培养家兔胸主动脉平滑肌细胞(VSMC),分别加入浓度为0μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L的tetraethyl-ammonium(TEA)干预VSMC生长24、48、72小时。采用噻唑蓝比色法(MTT)测定不同浓度TEA作用不同时间后的吸光度值并计算细胞抑制率；免疫组织化学法检查增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)蛋白的表达；流式细胞术(Flow Cytometry/financal capacity model FCM)测定细胞周期；蛋白质印迹(Western Blot)法检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(P-ERK1/2)水平的变化。 结果： 1.平滑肌细胞培养：典型的VSMC呈梭形,有典型的“峰谷样”生长,α-actin免疫细胞化学染色呈阳性。2.MTT检测对VSMC活性的影响：MTT法检测表明,在不同浓度TEA处理不同时间下,各组血管平滑肌细胞吸光度值与正常组相比明显降低(P0.01),并随TEA浓度的增加以及作用时间的延长,吸光度值逐渐减少(P0.01),细胞抑制率逐渐上升(P0.01)。3.免疫组化检查细胞PCNA蛋白表达：同正常对照组比较,经TEA处理后的VSMC PCNA蛋白阳性表达率下降,且随浓度的增加表达率逐渐下降(P0.01)。4.流式细胞术分选结果分析细胞周期：VSMC经不同浓度TEA处理24小时后,与正常组比较,各组G1期所占的百分比升高,而S期、G2期细胞所占百分比下降(P0.01),且随着浓度的增加差异更加明显(P0.01)。5.蛋白质印迹(western blot)法检测ERKl/2、P-ERK1/2蛋白的表达：与对照组比较,实验组的ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表达未见明显减少(P0.05)。结论： 1、TEA可呈浓度依赖性抑制VSMC的增殖； 2、TEA可呈浓度依赖性阻滞VSMC由G0/G1向S期推进； 3、TEA阻断BKCa抑制VSMC增殖不经由Ras-Raf-MEK-ERK/MAPK信号途径。
【关键词】：四乙胺 BKCa离子通道 动脉血管平滑肌细胞 增殖 信号传导通道
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 中英文对照及英文缩略表5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-13
• 实验材料13-15
• 1 实验动物13
• 2 主要试剂13-14
• 3 实验设备14-15
• 实验方法15-24
• 1 兔VSMC分离和培养15
• 2 兔VSMC鉴定15-16
• 3 实验分组及其处理16-17
• 4 四唑盐(MTT)比色实验测细胞活性17
• 5 免疫组化测PCNA17-18
• 6 流式细胞术测细胞周期18-19
• 7 免疫印迹法测ERK1/2、P-ERK1/2的蛋白表达19-23
• 8 统计方法23-24
• 实验结果24-29
• 1 显微镜下VSMC形态及免疫组化鉴定24
• 2 MTT法测定经TEA作用后VSMC增殖变化24-25
• 3 FCM测定不同浓度TEA作用下对VSMC的细胞周期的影响25-27
• 4 细胞免疫组化PCNA结果27
• 5 Wlestern Blot法测定VSMC ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表达27-29
• 讨论29-32
• 参考文献32-35
• 全文小结35-36
• 综述 BKCa对VSMC增殖及AS形成的作用36-48
• 参考文献43-48
• 致谢48

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：1103407