基于纳米颗粒的分子展示应用于超灵敏检测

发布时间：2017-10-27 17:24

  本文关键词：基于纳米颗粒的分子展示应用于超灵敏检测

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【摘要】：医学检验技术在疾病预防与诊断中具有重要作用，而基于纳米颗粒的功能性分子展示技术为医学检验提供强大的技术手段，能够实现对低丰度检测指标的检验。 目的：以乙型肝炎病毒（HBV）病毒样纳米颗粒和铁蛋白笼形结构纳米颗粒为研究对象，将检测相关的功能性分子分别展示在这两种纳米颗粒上，构建出可用于超灵敏检测的功能性纳米颗粒复合结构；并将其应用到Ⅰ型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）的P24抗原蛋白的分子检测，实现对其的高灵敏度检测。 方法：主要采用分子生物学的手段，将能够与抗体广谱性结合的金黄色葡萄球菌Protein G（SPG）展示在HBV病毒样纳米颗粒上，构建出具有抗体广谱性结合能力的HBV病毒样纳米颗粒复合体，并将其应用到HIV-1的P24抗原蛋白酶连免疫吸附分析（ELISA）检测中，检验其相对的检测灵敏度；将生物素结合肽（BAP）展示在铁蛋白笼形结构纳米颗粒上，并经生物素化，构建出具有链霉亲和素特异性结合能力的铁蛋白笼形纳米颗粒复合体，并将其应用到HIV-1的P24抗原蛋白的ELISA检测中，检验其相对的检测灵敏度。 结果：成功的构建出具有抗体广谱性结合能力的HBV病毒样纳米颗粒复合体，并将其应用到HIV-1的P24抗原检测中，其检测下限能够达到1ng/mL，较商业HIV-1P24ELISA试剂盒检测下限10ng/mL，检测灵敏度具有显著提高；成功的构建出具有链霉亲和素特异性结合能力的铁蛋白笼形纳米颗粒复合体，并将其应用到HIV-1的P24抗原检测中，其检测下限能够达到1ng/mL，较商业HIV-1P24ELISA试剂盒检测下限10ng/mL，检测灵敏度具有显著提高。 结论：研究中成功建立了基于HBV病毒样纳米颗粒及铁蛋白笼形结构纳米颗粒的分子展示技术平台，并将检测关联性的SPG和生物素分别展示在HBV病毒样纳米颗粒及铁蛋白笼形结构纳米颗粒上，实现了对HIV-1P24抗原的超灵敏检测，较商业标准化ELISA检测灵敏度具有显著提高。
【关键词】：纳米颗粒 分子展示 超灵敏检测
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3411
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 目录7-9
• 1 引言9-17
• 1.1 背景介绍9-10
• 1.2 理论依据10-13
• 1.2.1 HBV 病毒样纳米颗粒10-12
• 1.2.2 铁蛋白纳米颗粒12
• 1.2.3 基于蛋白质的纳米颗粒与分子展示12-13
• 1.3 研究目的与内容13-15
• 1.3.1 HBV 病毒样纳米颗粒的分子展示应用于检测的研究内容14-15
• 1.3.2 铁蛋白纳米颗粒的分子展示应用检测的研究内容15
• 1.4 预期结果与意义15-17
• 1.4.1 HBV 病毒样纳米颗粒的分子展示应用于检测的研究意义15-16
• 1.4.2 铁蛋白纳米颗粒的分子展示应用检测的研究意义16-17
• 2 基于 HBV 病毒样纳米颗粒分子展示的超灵敏检测17-49
• 2.1 材料与方法18-35
• 2.1.1 实验材料18-22
• 2.1.2 实验方法22-35
• 2.2 结果与分析35-49
• 2.2.1 重组质粒的构建35-41
• 2.2.2 HBcAg149的诱导表达、分离纯化和 TEM 表征41-43
• 2.2.3 HBcAg149-SPG 的表达、分离纯化和 TEM 表征43-46
• 2.2.4 HBcAg149-SPG 应用于超灵敏检测46-49
• 3 基于铁蛋白笼型纳米颗粒分子展示的超灵敏检测49-67
• 3.1 材料与方法49-55
• 3.1.1 实验材料49-50
• 3.1.2 实验方法50-55
• 3.2 结果与分析55-67
• 3.2.1 重组质粒的构建55-60
• 3.2.2 rHF 的诱导表达、分离纯化及 TEM 表征60-61
• 3.2.3 生物素化 rHF 的诱导表达、分离纯化及 TEM 表征61-64
• 3.2.4 生物素化 rHF 应用于超灵敏检测64-67
• 4 结论67-69
• 4.1 HBV 病毒样纳米颗粒的分子展示与超灵敏检测67-68
• 4.2 铁蛋白笼形纳米颗粒与分子展示68-69
• 参考文献69-73
• 文献综述73-87
• 参考文献83-87
• 致谢87-88

【共引文献】

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1 张敬畅,张信芳,曹维良,张天巧;负载型铁基复合氧化物催化苯酚羟基化的研究[J];分子催化;2003年01期

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 邱湘宁;DNA甲基化抑制剂5-氮杂胞苷和5-氮杂-2'-脱氧胞苷对编码和非编码RNA表达的影响[D];中南大学;2010年

2 刘金凤;PML NBs新组分分子鉴定及其在DNA损伤反应中的功能机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年

3 华修德;有机磷农药单残留及多残留免疫分析方法的建立与应用[D];南京农业大学;2012年

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1 郑少秋;CD133阳性/阴性肺癌细胞的分选、鉴定及差异基因的筛选[D];广州医学院;2010年

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本文编号：1104461