大鼠毛囊干细胞的鉴定及选择其最适培养液的研究

发布时间：2017-10-29 01:18

  本文关键词：大鼠毛囊干细胞的鉴定及选择其最适培养液的研究

  更多相关文章： 大鼠 毛囊干细胞 角质细胞无血清培养基 增殖

【摘要】：目的：对所培养的毛囊干细胞进行鉴定,并比较3种不同培养基对于大鼠毛囊干细胞增殖情况的影响。方法：取洁净SD大鼠乳鼠触须部组织,联合使用显微分离技术+中性蛋白酶Ⅱ消化+胰蛋白酶和乙二胺四乙酸混合液消化法获得细胞悬液,使用Ⅳ型胶原差速贴壁法筛选毛囊干细胞。通过倒置显微镜下观察细胞形态特征,吉姆萨染色、流式细胞仪CD34、β1-整合素(CD29)及CK15检测,成骨诱导后茜素红染色、成脂诱导后油红O检测联合用于鉴定所获得细胞为具有多向分化能力的毛囊干细胞。之后取显微分离法+二部酶消化法所得细胞悬液计数后按细胞量平均分为3组,分别使用DMEM/F12培养+体积分数10%胎牛血清、角质细胞无血清培养基以及角质细胞无血清培养基+体积分数10%胎牛血清分三组进行培养,从细胞活率、生长曲线、流式细胞仪鉴定标记物几个方面对三组培养后的干细胞进行比较,从而间接判断三种不同培养基对于毛囊干细胞增殖所产生的影响。结果：大鼠毛囊干细胞生长状况良好,CK15、CD34、β1-整合素(CD29)表达阳性,成骨诱导后茜素红染色阳性、成脂诱导后油红O阳性,此3组间细胞活率差异无显著性意义(P0.05)。生长曲线显示：生长速度角质细胞无血清培养基+体积分数10%胎牛血清DMEM/F12培养+体积分数10%胎牛血清角质细胞无血清培养基(P0.05)。DMEM/F12+10%胎牛血清组中CK15、CD34、β1-整合素(CD29)表达均低于其他2组(P0.05),角质细胞无血清培养基组CD34的表达高于角质细胞无血清培养基+10%胎牛血清组(P0.05),β1-整合素(CD29)及CK15则无统计学差异。结论：使用上述方法培养的大鼠毛囊干细胞生长状况良好,具有毛囊干细胞表面标志物,并具有多向分化能力。角质细胞无血清培养基较DMEM/F12+10%胎牛血清能培养出纯度更高的毛囊干细胞,且在此培养基基础上加入胎牛血清,能够促进细胞的增殖。
【关键词】：大鼠 毛囊干细胞 角质细胞无血清培养基 增殖
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-7
• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 研究内容与方法13-24
• 结果24-30
• 讨论30-39
• 小结39-40
• 致谢40-41
• 参考文献41-45
• 综述45-52
• 参考文献49-52
• 攻读硕士期间发表的论文52-53
• 导师评阅表53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 符刚,高强国,杨恬,余瑾,向明明;无血清K-SFM培养条件下大鼠毛囊Bu lge细胞生物学特性的研究[J];第三军医大学学报;2005年15期

2 陆立;陆安伟;;干细胞治疗女性压力性尿失禁的临床进展[J];国际妇产科学杂志;2011年02期

3 仇文颖;许增禄;徐园园;;成人毛囊干细胞分选及β-连环蛋白表达的研究[J];解剖学报;2006年02期

4 曾志勇;鲍春荣;丁芳宝;杨胜生;庄聪文;程先进;梅举;;人食管上皮细胞原代培养方法的改良研究[J];临床军医杂志;2009年04期

5 陈亮;丁明霞;左毅刚;;体外诱导猪骨髓间充质干细胞向尿路上皮细胞分化的实验研究[J];昆明医学院学报;2011年11期

6 陈建国;孟庆楠;赵德梅;谭谦;;胰岛素样细胞生长因子-1、碱性成纤维细胞生长因子及转化生长因子α对人表皮干细胞增殖的影响[J];医学研究生学报;2012年08期

7 林乐;李旭;杨茂伟;范广宇;;地塞米松对骨髓间充质干细胞Runx2表达的影响[J];山东医药;2009年26期

8 史明艳;林峰;杨学义;窦忠英;;不同浓度的EGF对山羊毛囊干细胞体外培养的影响[J];西北农业学报;2009年03期

9 宫晓洁;孙莉;黎靖宇;袁路;刘琦;陈维平;;昆明种小鼠胚胎神经干细胞的分离及培养[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年08期

10 王祝迁;木拉提·热夏提;李佳;王玉杰;;大鼠触须毛囊干细胞的分离培养和鉴定[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年27期

，

本文编号：1110780