钆喷酸葡胺标记人脐带间充质干细胞的体外MR成像转化实验研究

发布时间：2017-10-29 03:29

  本文关键词：钆喷酸葡胺标记人脐带间充质干细胞的体外MR成像转化实验研究

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【摘要】：研究目的： 1、建立从足月孕妇脐带分离间充质干细胞（MSCs）、体外扩增培养方法,研究此细胞在体外的生物学特性及表型特征，为应用MSCs研究奠定实验基础。 2、探讨Gd-DTPA标记MSCs的可行性，并研究磁标记干细胞的生物学特性是否改变。 3、应用不同转染试剂转染Gd-DTPA进入干细胞，筛选出转染率最高的试剂，为磁标记干细胞体外MR成像规律的研究奠定实验基础。 方法： 1、在无菌条件下取足月健康新生儿近脐部脐带，应用组织块贴壁法分离脐带间充质干细胞，应用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养。 2、应用流式细胞仪检测间充质干细胞表面标志物；光学显微镜下观察细胞的形态学特征；计数法检测细胞的增殖能力并绘制生长曲线；体外向成脂细胞和成骨细胞诱导验证其多向分化能力。 3、应用转染试剂转染Gd-DTPA进入MSCs，用1.5T临床应用型MR成像系统进行扫描，观察细胞的信号强度。 4、计数法检测磁标记干细胞的增殖能力，体外诱导磁标记干细胞向成脂细胞和成骨细胞分化，观察Gd-DTPA是否影响干细胞的生物学特性。 5、应用磷酸钙、Effectene、脂质体2000三种不同转染试剂转染干细胞，通过MRI测定信号强度及电感耦合等离子体原子发射光谱法测定细胞内钆的浓度，通过统计学分析筛选出转染率最高的试剂，并探索MR成像的最低细胞量及细胞内钆离子随细胞传代的变化规律。 结果： 1、应用组织块贴壁法能在两周后获得原代细胞，细胞呈长梭形，漩涡样生长，，传代后生长速度明显增快，传2代后细胞形态更为均匀一致；细胞生长曲线显示，从第4天起细胞生长进入对数生长期；培养的第3代细胞高表达CD29、CD44、CD90、CD105,而造血细胞表面标志物CD45，与移植免疫排斥密切相关的表面标志CD40、HLA-DR均为阴性表达，证实所培养的细胞是间充质干细胞；体外实验证实间充质干细胞能被诱导为成脂细胞和成骨细胞。 2、三种转染剂能成功转染Gd-DTPA进入干细胞，体外MRI扫描细胞在T1WI呈现高信号。 3、转染Gd-DTPA的干细胞，其增殖能力及多向分化能力均未受到影响。 4、通过MRI测定信号强度及电感耦合等离子体原子发射光谱法测定进入干细胞内Gd离子的浓度得出effectene转染Gd-DTPA的效率最佳；Gd-DTPA能标记的最小细胞量为5×10~4个；随细胞的增殖传代，Gd离子在细胞内的数量逐渐减少，细胞信号强度在T1WI逐渐降低。 结论 1、用组织块贴壁法成功在体外从脐带中分离培养出hUCMSCs，并可稳定传代培养获得较纯的MSCs； 2、hUCMSCs具有间充质干细胞的基本生物学特征，可在体外定向诱导分化为成脂细胞和成骨细胞，说明其具有多向分化潜能。 3、应用Gd-DTPA标记人脐带间充质干细胞是可行的，标记后的干细胞增殖能力及多向分化潜能均未受到影响。 4、1.5T临床型MRI能体外示踪到转染Gd-DTPA的干细胞，细胞信号强度随细胞的传代逐渐降低，体外能示踪到磁标记干细胞的时间持续约12天。
【关键词】：间充质干细胞 磁共振成像 钆喷酸葡胺 示踪
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 目录8-9
• 英文缩略词表9-10
• 前言10-12
• 第一章 hUCMSCs 的体外分离培养、鉴定及生物学特性12-24
• 1 研究目的12
• 2 材料与方法12-17
• 3 实验结果17-22
• 4 讨论22-23
• 5 结论23-24
• 第二章 钆喷酸葡胺标记人脐带间充质干细胞的体外 MR 成像24-37
• 1 研究目的24
• 2 材料与方法24-27
• 3 实验结果27-33
• 4 讨论33-36
• 5 结论36-37
• 参考文献37-42
• 综述42-50
• 参考文献47-50
• 攻读硕士期间发表的论文50-51
• 致谢51

【参考文献】

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本文编号：1111235