Peyer小结B淋巴细胞分化过程中S1P1表达变化及Tfh相关因子对B淋巴细胞S1P1表达的影响

发布时间：2017-10-29 21:22

  本文关键词：Peyer小结B淋巴细胞分化过程中S1P1表达变化及Tfh相关因子对B淋巴细胞S1P1表达的影响

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【摘要】：目的： 研究S1P1在不同分化阶段B淋巴细胞（B220+IgA-B淋巴细胞、B220+IgA+B淋巴细胞、B220-IgA+浆母细胞）的表达以及Tfh细胞因子IL-4、IL-21、TGF-β1等对S1P1表达的影响。 方法： 1.选用BALB/c小鼠，采用隔日口服0.1%牛血清白蛋白（BSA），两周后将小鼠断颈处死，取小肠段Peyer小结免疫组化染色，观察不同分化阶段的B淋巴细胞在Peyer小结中的定位及S1P1的分布情况。 2.流式细胞术检测Peyer小结细胞膜表面S1P1在（B220+IgA-B淋巴细胞、B220+IgA+B淋巴细胞、 B220-IgA+浆母细胞）这三种细胞群中的表达情况。 3.选用BALB/c小鼠，无菌条件下采用密度梯度离心法获取脾脏单个核细胞。磁珠分选法获得纯度为95%以上的B220+细胞，分别加用IL-4、IL-21、TGF-β1孵育，于加入后0h、24h、48h、72h、96h收集细胞，流式细胞术检测IL-4、IL-21和对照组细胞膜表面S1P1的表达情况，判断这两个细胞因子对S1P1表达的影响。 4.对TGF-β1干预组及其对照组在24h、48h、72h提取细胞总蛋白，IL-4、IL-21干预组及其对照组在24h、96h、120h提取细胞总蛋白，Western-blot检测不同组别S1P1的表达。 结果： 1.免疫组化结果表明，Peyer小结生发中心存在大量B220+细胞，IgA+细胞散在分布于生发中心的明带与暗带，在明带偶可见其成团分布。CD138+细胞在生发中心暗带区可见散在分布。S1P1+细胞在生发中心明带与暗带均可见分布，以中央明带区数目更多。 2.流式细胞术检测Peyer小结细胞，测得细胞膜表面S1P1在B220+IgA-B细胞荧光率为（9.673±4.302）%，在B220+IgA+B细胞为（36.39±9.193）%，在B220-IgA+浆母细胞为（52.91±8.185）%。并且B220+IgA-B细胞与B220+IgA+B细胞相比，P＜0.05；B220+IgA-B细胞与B220-IgA+浆母细胞相比，P＜0.005；B220+IgA+B细胞与B220-IgA+浆母细胞相比，P＞0.05。 3.细胞因子干预后的B220+细胞流式细胞术检测细胞膜表面S1P1发现，IL-4(200ng/107cells)干预0h,24h,48h,72h,96h后，S1P1表达细胞百分率为3.02±1.232，，6.23±3.600，5.75±3.216，11.86±3.614，38.36±5.558；IL-21(100ng/107cells)干预0h,24h,48h,72h,96h后，S1P1表达细胞百分率分别为1.87±0.578，5.92±2.772，7.56±4.228，20.65±3.791，46.77±7.893；IL-4(200ng/107cells)与IL-21(100ng/107cells)共同干预0h,24h,48h,72h,96h后,S1P1表达细胞百分率分别为2.77±1.103，5.45±2.113，8.40±1.472，14.13±4.221，43.77±3.316；而未加细胞因子的对照组0h,24h,48h,72h,96h后分别为2.34±0.910，2.26±1.220，5.22±1.571，9.383±6.548，15.16±4.327。从结果中可以看出，各干预组与对照组在0到48h之间细胞膜表面S1P1表达量无明显差异，从72h到96h，各干预组S1P1表达量出现明显上升，说明IL-4与IL-21对B220+细胞上调细胞膜S1P1受体有促进作用。 4.Western-blot结果显示，TGF-β1刺激后的B220+细胞，其S1P1的表达量在24h、48h、72h呈上升趋势（时间点之间P＜0.05），且高于对照组（24h P=0.0003，48h P=0.0006），说明TGF-β1对于B220+细胞上调S1P1表达有促进作用；IL-4、IL-21、IL-4和IL-21刺激组S1P1表达量在24h到96h之间呈明显上升趋势，且明显高于对照组，但96h到120h之间增长不明显。 结论：Peyer小结内B淋巴细胞经历B220+IgA-、B220+IgA+、B220-IgA+几个阶段，不断分化成熟，且逐渐从生发中心的暗带区迁移至FDC较多的明带区，在这里接触FDC提呈的抗原并受到CD4+T细胞进一步活化发育成浆细胞。而S1P1受体的表达量亦随其分化成熟不断上调，使其更易受S1P的趋化进入输出淋巴系统。Tfh细胞因子TGF-β1、IL-4、IL-21均能上调B淋巴细胞S1P1的表达，但是IL-4与IL-21干预组在96h之后，S1P1上升趋势不显著，提示可能S1P1表达量已达到最大值或饱和状态。
【关键词】：S1P1 IL-4 IL-21 TGF-β1 Peyer小结 B220+细胞
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 中英文缩写名词对照表6-7
• 摘要7-10
• Abstract10-13
• 第一部分 Peyer小结 B淋巴细胞不同分化阶段 S1P1表达变化的实验研究13-31
• 前言13-15
• 材料和方法15-21
• 结果21-26
• 讨论26-28
• 小结28-29
• 参考文献29-31
• 第二部分 脾脏 B220+B 细胞 S1P1 的表达与 IL-4、IL-21、TGF-β1 的关系31-54
• 前言31-33
• 材料和方法33-41
• 结果41-45
• 讨论45-50
• 小结50-51
• 参考文献51-54
• 综述54-65
• 参考文献60-65
• 致谢65

【共引文献】

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本文编号：1114720