HSF1对Dp71表达的调控研究

发布时间：2017-10-30 21:09

  本文关键词：HSF1对Dp71表达的调控研究

  更多相关文章： 热休克因子1(HSF1) 表达调控 Dp71

【摘要】：Dp71是抗肌萎缩蛋白(dystrophin)基因家族在诸多组织均有表达的一个具有多种功能的同源异构体蛋白。近年来的一系列研究表明：该蛋白在神经系统的发育,神经系统功能的维护以及神经细胞的黏附和增殖过程起着重要的作用。作为介导应激反应中热休克蛋白(heat shock proteins, HSPs)产生的重要转录因子,热休克因子1(heat shock factor1,HSF1)还能通过结合其他基因(如iNOS、Fas)启动子区的HSE影响其mRNA和蛋白水平表达来发挥其他生物学功能。生物信息学软件分析发现小鼠和人的Dp71启动子区含有一个热休克元件(HSE),表明Dp71的表达可能受到HSF1的调控。本课题主要是研究HSF1对Dp71基因的表达的影响,从而探讨Dp71作为HSF1可能的下游调节产物,最终导致HSF1基因敲除小鼠产生一系列神经系统症状。 本课题主要采取以下方法：1、取野生型小鼠和HSF1敲除小鼠的大脑、肺、肝脏、肾脏、脾脏等组织,提取蛋白和mRNA做Western-blot和Real time RT-PCR,在整体动物上检测HSF1敲除对DP71在非肌肉组织中表达水平的影响；2、人肺癌A549细胞转染HSF1真核表达质粒和干扰质粒,Western-blot和Real time RT-PCR检测细胞中HSF1表达的上调或下调对DP71的]mRNA和蛋白表达水平的影响；3、EMS A和双荧光素酶报告基因系统从分子水平验证HSF1与Dp71基因启动子区HSE的结合。 结果显示：(1)和野生型小鼠相比,HSF1敲除小鼠非肌肉组织中Dp71的mRNA和蛋白表达水平下降,其中脑组织和肺组织中表达有差异,其差值具有统计学意义；(2)A549细胞中转染HSF1真核表达质粒和干扰质粒明显升高和降低A549细胞Dp71的mRNA和蛋白表达水平(3)EMSA和荧光素酶报告基因证实HSF1能与Dp71基因启动子区的HSE直接结合。以上结果表明：整体动物中HSF1缺失可使Dp71在非肌肉组织中表达降低；HSF1过表达和表达抑制使得A549细胞中Dp71基础表达分别升高和降低；分子水平证实HSF1直接结合Dp71基因启动子区的HSE。图16幅,表2个,参考文献58篇
【关键词】：热休克因子1(HSF1) 表达调控 Dp71
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要5-6
• 英文摘要6-8
• 目录8-10
• 符号说明10-11
• 第一章 前言11-15
• 第二章 材料与方法15-32
• 2.1 材料15-19
• 2.1.1 动物15
• 2.1.2 实验细胞、菌株、质粒15
• 2.1.3 主要试剂15-16
• 2.1.4 主要仪器16-17
• 2.1.5 引物以及探针序列17
• 2.1.6 主要溶液的配置17-19
• 2.2 方法19-31
• 2.2.1 整体表达谱的研究19-22
• 2.2.2 细胞水平HSF1对Dp71调控的验证22-23
• 2.2.3 调控机制的研究23-31
• 2.3 数据结果统计学处理31-32
• 第三章 实验结果32-40
• 3.1 HSF1敲除对小鼠脑、肺、肾、肝、脾组织DP71表达的影响32-33
• 3.1.1 HSF1基因敲除(HSF1-/-)小鼠和野生型(HSF1+/)小鼠Dp71mRNA表达谱32
• 3.1.2 HSF1基因敲除(HSF1-/-)小鼠和野生型(HSF1+/+)小鼠Dp71蛋白表达谱32-33
• 3.2 HSF1过表达与表达抑制对DP71 MRNA与蛋白表达的影响33-36
• 3.2.1 过表达HSF1对Dp71 mRNA与蛋白表达的影响33-35
• 3.2.2 抑制A549细胞HSF1表达对Dp71 mRNA与蛋白表达的影响35-36
• 3.3 HSF1对DP71表达调控的分子机制研究36-40
• 3.3.1 EMSA检测HSF1与Dp71基因启动子区HSE的结合情况36-37
• 3.3.2 双荧光素酶报告基因检测系统探讨HSF1过表达对Dp71启动子转录活性的影响37-40
• 第四章 讨论40-42
• 第五章 结论42-43
• 参考文献43-48
• 综述48-56
• 参考文献53-56
• 附录56-59
• 攻读学位期间主要的研究成果59-60
• 致谢60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 黎青;李少英;胡冬贵;孙筱放;陈敦金;张成;蒋玮莹;;假肥大型肌营养不良症的产前基因诊断(英文)[J];北京大学学报(医学版);2006年01期

2 梁颖茵;张成;陈松林;冯善伟;;3号外显子缺失后dystrophin蛋白空间结构和功能改变[J];南方医科大学学报;2008年06期

3 许弘飞;李永宏;陈阳;程利宝;;病毒性心肌炎和扩张性心肌病中Dystrophin蛋白的表达[J];法医学杂志;2006年01期

4 朱海燕;邬玲仟;梁德生;夏家辉;;DMD基因突变及突变检测技术研究进展[J];基础医学与临床;2005年11期

5 王伟文;廖晓阳;吴渝宪;王庆松;;抗肌萎缩蛋白在不同类型肌营养不良症中表达的研究[J];中国全科医学;2010年03期

6 岳俊杰,汪莉,王月兰,李北平,梁龙,俞炜源,黄培堂;SARS病毒S蛋白三维结构预测[J];生物技术通讯;2003年05期

7 朱熊兆;程明;彭敏;姚树桥;;雄性HSF1基因缺陷小鼠的行为改变[J];心理学报;2007年02期

8 周畅;张成;;反义寡核苷酸干预剪接治疗Duchenne型肌营养不良[J];中华神经科杂志;2006年08期

9 张成,冯慧宇,黄绍良,方建培,肖露露,姚晓黎,陈纯,叶欣,曾缨,卢锡林,文剑明,张为西,李中,冯善伟,徐宏贵,黄科,周敦华,陈维,谢有梅,席静,张萌,黎阳,刘颖;脐血干细胞移植治疗假肥大型肌营养不良症[J];中华医学遗传学杂志;2005年04期

10 李惠英;周红雨;;Duchenne型肌营养不良肌肉病变机制研究[J];中国神经免疫学和神经病学杂志;2008年02期

，

本文编号：1119314