RNA氧化与线虫衰老的相关性研究

发布时间：2017-10-31 22:23

  本文关键词：RNA氧化与线虫衰老的相关性研究

  更多相关文章： RNA氧化 衰老 8-氧化鸟嘌呤 let-363 NDX-4

【摘要】：研究目的：探究RNA氧化与线虫生命周期的相关性。 研究内容：研究线虫NDX-4蛋白的体外酶学活性；建立RNA氧化水平增加的线虫模型；观察RNA氧化水平增加后线虫生命周期的改变,初步探讨可能机制。 研究方法：体外表达NDX-4,采用HPLC-UV技术检测其对8-oxodGTP和8-oxoGTP的酶学活性；对NDX-4基因缺陷线虫进行不同浓度的外源性底物刺激,采用质谱技术检测RNA氧化水平,以RNA中8-oxoG含量(每106个G中的个数)表示,建立RNA氧化水平增加的线虫模型；以KHB处理组为对照,观察外源性底物刺激后线虫生命周期的改变；采用质谱技术分别检测加压后不同时间点0.5、1、2、4、8、12、16、20小时线虫体内的RNA氧化水平,观察外源性底物刺激后线虫体内RNA氧化碱基代谢规律；建立检测let-363表达的Real-time RT-PCR体系,并采用Real-time RT-PCR技术,以KHB为对照,计算2-ΔΔCt值,检测加压后let-363基因随时间的表达规律。 研究成果：HPLC-UV检测显示NDX-4蛋白能将8-oxodGTP和8-oxoGTP酶解为相应的单磷酸和二磷酸形式；成功构建RNA氧化水平增加的线虫模型；与对照相比,RNA氧化水平增加的线虫生命周期缩短；观察外源性底物刺激后线虫体内RNA氧化碱基代谢规律：氧化加压后4小时氧化碱基达最高水平,其后逐渐降低,8小时恢复至对照组水平；RNA氧化水平增加后,线虫let-363mRNA含量改变。 结论：线虫NDX-4蛋白对8-oxodGTP和8-oxoGTP均具有酶学活性；线虫体内RNA氧化水平增加后,其生命周期缩短；线虫体内RNA氧化水平增加引起let-363表达变化,是否与线虫生命周期缩短相关需要进一步实验验证。
【关键词】：RNA氧化 衰老 8-氧化鸟嘌呤 let-363 NDX-4
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R339.38
【目录】：

• 英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 第一部分 NDX-4蛋白的体外表达及酶学活性研究13-30
• 一、材料与方法13-24
• 1. 材料13-16
• 2. 方法16-24
• 2.1 NDX-4的原核表达16-23
• 2.2 NDX-4的酶学活性研究23-24
• 二、结果24-28
• 三、讨论28-29
• 四、结论29-30
• 第二部分 RNA氧化对线虫寿命的影响30-59
• 一、材料与方法30-46
• 1. 材料30-33
• 2. 方法33-46
• 2.1 回交实验33-34
• 2.2 8-oxoGTP加压实验34-38
• 2.3 生命周期实验38-39
• 2.4 加压后线虫体内RNA氧化碱基的代谢39-40
• 2.5 加压后与寿命相关基因let-363的表达40-46
• 二、结果46-56
• 三、讨论56-58
• 四、结论58-59
• 参考文献59-63
• 致谢63-64
• 文献综述64-69
• 参考文献67-69
• 已发表文章及首页69-70
• 个人简历70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：1124040