Runx2重组慢病毒感染骨髓间充质干细胞并促进其成骨分化的研究

发布时间：2017-11-07 01:09

  本文关键词：Runx2重组慢病毒感染骨髓间充质干细胞并促进其成骨分化的研究

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【摘要】：目的利用重组Runx2基因的慢病毒感染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),使其Runx2基因的表达水平提高,观察BMSCs成骨相关基因的表达情况,研究Runx2基因促进BMSCs的成骨分化情况。方法 PCR扩增Runx2基因,并连接到慢病毒表达载体质粒Pez-lv201,与包装质粒共转染293T细胞进行包装,测得慢病毒液滴度。取4周龄SD大鼠胫骨,分离、培养BMSCs,流式细胞仪鉴定。将Runx2重组慢病毒感染BMSCs。显微镜下观察细胞形态变化;RT-PCR分析BMSCs成骨基因的表达情况。结果Runx2基因重组慢病毒表达载体质粒酶切和测序鉴定正确。测得慢病毒液滴度为1.6×109TU/ml。流式细胞仪检测表面抗原CD90和CD105,表达率为99.8%、99.3%。重组慢病毒感染后实验组细胞形态呈成骨样细胞改变;对照组未见明显变化。实验组Runx2、OCN、osteonectin、ALP、BMP-2、OPN基因的表达水平随时间推移而增高;对照组上述基因均无明显表达。结论利用Runx2重组慢病毒感染BMSCs,使其高表达Runx2基因,可以使OCN、osteonectin、ALP、BMP-2、OPN基因表达增强,说明Runx2基因可以促进BMSCs向成骨方向分化。
【作者单位】： 浙江医院骨一科;深圳市第二人民医院骨科;
【基金】：广东省自然科学基金(s2012010008129) 深圳市战略新兴产业发展专项资金项目(ZDSY20120614154551201) 深圳市科技研发资金项目(CXZZ20120614160234842);深圳市科技研发资金项目(JCYJ20130401113330839);深圳市科技研发资金项目(CXZZ20130321152713220) 深圳市重点实验室提升项目(CXB201104220049A) 广东省大学生创新训练项目(1056013089)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 大面积骨缺损一直是创伤骨科的治疗难题。自体骨、异体骨以及人工骨材料的填充都难以有效治疗大面积的骨缺损。骨组织工程通过整合支架材料、种子细胞、活性因子等提高人工骨材料的成骨活性,对促进骨愈合有重要作用[1]。BMSCs作为种子细胞,在骨修复与重建中可分化为成骨细胞、

【参考文献】

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本文编号：1150175