人颗粒酶A活性段的表达、纯化及其活性鉴定

发布时间：2017-11-07 12:12

  本文关键词：人颗粒酶A活性段的表达、纯化及其活性鉴定

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【摘要】：目的:克隆和表达人颗粒酶A(Granzyme A,Gzm A)基因的活性片段(active Granzyme A,a Gzm A)并进行活性鉴定。方法:以全长人Gzm A基因为模板,PCR扩增a Gzm A基因片段,限制性内切酶NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后插入原核表达载体p ET24a(+),将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行分析。重组蛋白用镍层析柱亲和层析进行纯化后,利用BLT底物溶液进行活性鉴定。结果:PCR扩增得到长约700 bp的基因片段。重组质粒p ET24a-a Gzm A经酶切和测序证实a Gzm A基因序列正确插入载体质粒中。SDS-PAGE显示在26 k D处有一特异性蛋白条带。Western blot证实该蛋白可与小鼠抗His单克隆抗体发生特异性结合。利用镍柱亲和层析法可从包涵体中纯化得到纯度较高的重组蛋白,且具有较好的酶活性。结论:成功制备了具有生物学活性的人颗粒酶A重组蛋白。
【作者单位】： 华东师范大学生命科学学院;
【基金】：国家自然科学基金(No.81072459) 教育部新世纪优秀人才支持计划(No.NCET-12-0179) 上海大学生创新活动计划项目(No.KY2012-56S) 国家大学生创新训练计划项目(No.1310269032)资助项目
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 1本文为国家自然科学基金(No.81072459)、教育部新世纪优秀人才支持计划(No.NCET-12-0179)、上海大学生创新活动计划项目(No.KY2012-56S)和国家大学生创新训练计划项目(No.1310269032)资助项目。颗粒酶A(Granzyme A,Gzm A)是一种存在于细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocy

【参考文献】

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本文编号：1152363