转化生长因子β3联合骨形态发生蛋白2双基因诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞的分化

发布时间：2017-11-09 18:08

  本文关键词：转化生长因子β3联合骨形态发生蛋白2双基因诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞的分化

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【摘要】：目的：探讨慢病毒介导的转化生长因子β3(transforming growthfactor β3, TGF-β3)联合骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2, BMP-2)在诱导骨髓间充质干细胞(bone marrowderived mesenchymal stem cells, BMSC)向成骨细胞表型转化中的可能性及相互作用机制。 方法：1.构建慢病毒：构建携带绿色荧光蛋白、tgfβ3和BMP-2基因的重组慢病毒载体,包装、生产重组后的慢病毒(Lv-GFP、Lv-tgfβ3-GFP、Lv-BMP2-GFP、Lv-BMP2-tgfβ3-GFP);2.原代细胞培养：取幼兔骨髓间充质干细胞,体外培养、传代,至第三代用于实验；3.转染与检测：将包装后的重组慢病毒按所携带的不同基因分四组转染体外培养的第三代骨髓间充质干细胞,继续体外培养,于转染后1周分别提取各细胞的总RNA和蛋白,分别采用实时定量PCR技术、免疫印迹法检测各组中目的基因和相应蛋白的表达情况。 结果：通过重组慢病毒转染技术,可以将目的基因tgfβ3和BMP-2同时整合入骨髓间充质干细胞内,并实现了双基因的稳定表达。成功转染的骨髓间充质干细胞中基因tgfβ3和BMP-2在核酸及蛋白水平均明显高于单基因转染组及空白对照组(P0.05),提示tgfβ3联合BMP-2有更高的诱导BMSC向成骨表型转化的潜能,且两者之间具有协同作用。 结论：通过慢病毒转染技术将tgfβ3和BMP-2整合入体外培养的骨髓间充质干细胞内使其在细胞内稳定表达,能诱导其向成骨表型分化,通过不同组的检测结果表明,双基因组的协同作用克服了单一基因组的不足,可以为干细胞为基础的成骨组织工程提供新的方法。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R450;R329

【参考文献】

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本文编号：1162981