重组抗狂犬病病毒抗体在HEK293 EBNA1细胞中的瞬时表达优化

发布时间：2017-11-11 09:05

  本文关键词：重组抗狂犬病病毒抗体在HEK293 EBNA1细胞中的瞬时表达优化

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【摘要】：目的:优化重组抗体在悬浮无血清培养的HEK293 EBNA1瞬时表达,提高重组抗体表达量。方法:将HEK293 EBNA1细胞适应于无血清悬浮培养,筛选适宜的无血清培养基。使用PEI转染质粒进入细胞,瞬时表达重组抗体;使用Modde软件进行实验设计(DOE),优化转染质粒量、轻重链比例、PEI量等影响瞬时表达的条件。培养上清经亲和纯化,获得目标抗体,用快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)测定抗体活性,用BCA法测定纯化抗体浓度。结果:293SFMII为适宜的HEK293 EBNA1细胞无血清悬浮培养基。对抗体表达影响最大的因素是轻重链比例(P=0.00000),其次为质粒浓度(P=0.00086),最后为PEI(P=0.00257)。优化的转染条件为:质粒用量0.61μg/106细胞,轻重链比例2:1,PEI 2.67μg/106细胞,优化后抗体表达量有显著提高(P=0.007)。结论:通过DOE优化获得了重组抗狂犬病病毒抗体的高水平表达,抗体表达量提高了至少50倍。
【作者单位】： 兰州生物制品研究所有限责任公司;
【基金】：甘肃省青年科技基金计划(145RJYA290)
【分类号】：R392
【正文快照】： Chinese Library Classification(CLC):Q812 Document code:AArticle ID:1673-6273(2015)33-6439-05前言对大部分抗体分子而言,其重链糖基化对其功能具有非常重要的影响,因此,抗体分子的功能验证一般需要使用哺乳动物细胞系统表达进行。瞬时基因表达(Transient gene expres-si

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