核因子E2相关因子2基因沉默对缺氧预处理骨髓间充质干细胞凋亡的影响

发布时间：2017-11-11 09:15

  本文关键词：核因子E2相关因子2基因沉默对缺氧预处理骨髓间充质干细胞凋亡的影响

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【摘要】：目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)基因沉默对缺氧预处理骨髓间充质干细胞(MSC)凋亡的影响,为干细胞移植治疗心肌梗死提供较优良的种子细胞。方法将沉默小干扰RNA(siRNA)Nrf2的慢病毒载体(LV-GFP-siRNA-Nrf2)转染入大鼠MSC(GFP-LV-MSC~(Nrf2-/-),简称MSC~(Nrf2-/-)),采用Western印迹法检测Nrf2基因RNA干扰(RNAi)前后的蛋白质表达变化。实验细胞经缺氧预处理后分入4组:缺氧沉默Nrf2的MSC组(MSC~(Nrf2-/-)缺氧组),缺氧常态Nrf2的MSC组(MSC~(Nrf2+/-)缺氧组),沉默Nrf2的MSC组(MSC~(Nrf2-/-)常氧组),常态Nrf2的MSC组(MSC~(Nrf2+/-)常氧组)。采用Annexin V/7-AAD染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况,细胞免疫荧光法测凋亡蛋白天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶(Caspase)3的表达水平,Western印迹法测定Nrf2及其下游靶点血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白质表达水平,以及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果干扰细胞内Nrf2蛋白质后,MSC~(Nrf2-/-)常氧组的Nrf2核蛋白表达水平显著低于MSC~(Nrf2+/-)常氧组(P0.05)。细胞缺氧后6h,MSC~(Nrf2+/-)缺氧组和MSC~(Nrf2-/-)缺氧组的细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均显著高于MSC~(Nrf2+/-)常氧组和MSC~(Nrf2-/-)常氧组(P值均0.05),MSC~(Nrf2-/-)缺氧组的细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均显著高于MSC~(Nrf2+/-)缺氧组(P值均0.05)。MSC~(Nrf2-/-)缺氧组见大量Caspase3蛋白质表达,MSC~(Nrf2+/-)缺氧组Caspase3蛋白质表达减少;MSC~(Nrf2+/-)常氧组和MSC~(Nrf2-/-)常氧组均未见Caspase3蛋白质明显表达。MSC~(Nrf2+/-)常氧组与MSC~(Nrf2-/-)常氧组间Nrf2、HO-1、Bcl-2、Bax蛋白质表达水平的差异均无统计学意义(P值均0.05)。与MSC~(Nrf2+/-)常氧组比较,MSC~(Nrf2+/-)缺氧组的Nrf2、HO-1、Bax蛋白质水平均显著升高(P值均0.05),Bcl-2蛋白质表达水平显著降低(P0.05);MSC~(Nrf2-/-)缺氧组的Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白质表达水平均显著降低(P值均0.05),Bax蛋白质表达水平显著升高(P0.05)。与MSC~(Nrf2+/-)缺氧组比较,MSC~(Nrf2-/-)缺氧组的Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白质表达水平均显著降低(P值均0.05),Bax蛋白质表达水平显著升高(P0.05)。结论沉默细胞中的Nrf2基因可显著降低干细胞对缺氧的耐受能力,进一步加速细胞凋亡。
【作者单位】： 遵义医学院附属医院心内科;
【基金】：国家自然科学基金(NSFC 81360021) 贵州省科学技术基金(黔科合J字号LKZ[2012]29号)资助项目
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 骨髓间充质干细胞(MSC)是组织工程中最常剂盒购自美国eBioscience公司,兔抗大鼠Nrf2、用的种子细胞之一。然而研究[1]证实,局部组织中血红素加氧酶(HO)-1、Bcl-2、Bax、天冬氨酸半胱缺血、缺氧微环境和早期炎性反应均不利于移植细氨酸蛋白酶(Caspase)3、GAPDH和核内参抗体胞的

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