三种不同方法转染THP-1巨噬细胞效果比较

发布时间：2017-11-13 08:18

  本文关键词：三种不同方法转染THP-1巨噬细胞效果比较

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【摘要】：目的探讨通过腺病毒,慢病毒,脂质体2000三种方法转染THP-1巨噬细胞的最佳方法。方法采用腺病毒,慢病毒,脂质体2000三种方法分别转染THP-1巨噬细胞,并用荧光显微镜观察细胞转染荧光表达情况,流式细胞仪检测THP-1细胞转染效率,台盼蓝染色检测细胞病死率。结果腺病毒对THP-1巨噬细胞转染效率可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平,但可能对细胞免疫状态影响大。MOI=200时,转染效率较低,仅为(29.81±2.50)%,细胞病死率为(5.17±0.44)%;MOI=800,转染效率最高,EGFP阳性率可达(86.49±6.11)%,细胞病死率为(8.80±0.54)%;MOI升至1200后,EGFP阳性率为(77.88±5.77)%,细胞病死率上升明显(14.50±0.77)%(P0.05);慢病毒转染效率高及细胞毒性较腺病毒低,但因其病毒产量低,实验消耗病毒量大,因而影响其应用。当MOI=10时,EGFP阳性率仅为(28.09±1.67)%,细胞病死率为(4.74±0.31)%;MOI=60时,转染率最高,EGFP阳性率为(91.96±1.66)%,细胞病死率升至(7.25±0.50)%,此时病死率才有统计学意义(P0.05)。脂质体2000对THP-1巨噬细胞毒性较大,细胞死亡率高,转染效率极低,不适合转染。结论腺病毒与慢病毒转染THP-1巨噬细胞各存在一定优劣,在实验中需酌情选择,脂质体2000不适宜转染THP-1巨噬细胞。
【作者单位】： 中国人民解放军第二军医大学南京临床学院;南京军区南京总医院呼吸与危重症学科;南京大学医学院临床学院;
【基金】：国家自然科学基金(81270064)
【分类号】：R392
【正文快照】： THP-1悬浮细胞为人白血病单核细胞系,属于血液系统肿瘤细胞范畴,佛波酯(PMA)能够诱导THP-1贴壁,并在48 h左右分化成熟,生成THP-1巨噬细胞[1-3]。THP-1巨噬细胞为终末细胞,丧失增殖分化能力,在光镜下可见其紧密贴壁,呈现梭形或者多形性,并有伪足形成,电镜下则可见胞浆内线粒体

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 方芳;朱平;;慢病毒载体的改进为基因治疗带来了新的希望[J];中国实验血液学杂志;2013年05期

2 王险峰;王昊;张帆;刘浩;杜军;;吲哚胺加双氧酶的表达调控THP-1巨噬细胞的极化[J];细胞与分子免疫学杂志;2014年09期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 刘德勇;张庆丽;龙晓兰;彭和人;谢海龙;;S100A11慢病毒表达载体的构建及其在肝癌细胞中的表达[J];中南医学科学杂志;2014年06期

2 武瑞琴;朱旭东;周晓巍;黄培堂;;慢病毒载体介导的层黏连蛋白受体稳定抑制细胞株的建立[J];生物技术通讯;2014年06期

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 王权;烟曲霉感染中TLR2和转录因子PU.1对Dectin-1表达影响的研究[D];第二军医大学;2013年

2 颜文杰;维生素D3在烟曲霉呼吸道感染中的作用[D];第二军医大学;2014年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 王莉莎,段海峰,王立生;提高腺病毒载体转染造血细胞效率的研究进展[J];中国实验血液学杂志;2004年03期

2 王逸群,朱平;遗传性铁粒幼细胞贫血研究进展及基因治疗的可能性[J];中国实验血液学杂志;2005年03期

3 胡绍燕;陈子兴;赵晔;岑建农;谷敏;傅铮铮;何军;顾伟英;;WT1基因启动子和增强子在不同细胞株中的转录活性研究[J];中国实验血液学杂志;2007年05期

4 顾江英,朱平;基因治疗疾病的憧憬与挫折[J];自然杂志;2004年02期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 叶天星,曹雪涛;巨噬细胞作用的新概念:正反两面性[J];国外医学(免疫学分册);1990年02期

2 彭则;呼吸道细菌感染及在巨噬细胞上的信息传递途径[J];国外医学.呼吸系统分册;1999年01期

3 付平,许国章;巨噬细胞与肾损伤[J];国外医学.泌尿系统分册;2000年06期

4 夏飞,刘胜武,魏雅稚,肖凌;结核分枝杆菌诱导宿主巨噬细胞凋亡机制初探[J];中华微生物学和免疫学杂志;2005年06期

5 葛晶;成蓓;;过氧化物酶体增殖体激活受体和肝X受体对巨噬细胞作用的研究进展[J];国外医学(老年医学分册);2006年01期

6 张凤;熊思东;;巨噬细胞的极化及其意义[J];细胞生物学杂志;2007年01期

7 韩君勇;李艳波;;不同压力对巨噬细胞ATP结合盒转运子A_1表达的影响[J];中国心血管病研究;2008年05期

8 熊思东;;疾病发病中的巨噬细胞极化:机制与作用[J];现代免疫学;2010年05期

9 吴虢东;张才军;王玲;吴磊;寸新华;曹霞;;抗结核天然药物筛选的巨噬细胞模型研究[J];昆明医学院学报;2010年11期

10 李丹;任亚娜;范华骅;;巨噬细胞的分类及其调节性功能的差异[J];生命科学;2011年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 宋盛;周非凡;邢达;;PDT诱导的凋亡细胞对巨噬细胞NO合成的影响[A];第七届全国光生物学学术会议论文摘要集[C];2010年

2 张磊;朱建华;黄元伟;姚航平;;血管紧张素Ⅱ对巨噬细胞(THP-1重细胞)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体表达的影响[A];浙江省免疫学会第五次学术研讨会论文汇编[C];2004年

3 宋盛;邢达;周非凡;;PDT诱导的凋亡细胞对巨噬细胞NO合成的影响[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年

4 赵莉;姚树桐;田华;杨娜娜;桑慧;焦鹏;王义围;秦树存;;氧化高密度脂蛋白通过内质网应激凋亡途径诱导巨噬细胞凋亡[A];第十二届全国脂质与脂蛋白学术会议论文汇编[C];2014年

5 洪敏;余黎;华永庆;朱荃;;雌二醇激活巨噬细胞及内异症药物效应靶点的研究[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年

6 唐澜;王丽;付度关;赵勇;曾和松;;瘦素对巨噬细胞白介素-1表达的影响[A];中华医学会心血管病学分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2006年

7 郭紫芬;袁皓瑜;郭琰;庹勤慧;廖端芳;;依泽替米贝通过调控基因表达抑制巨噬细胞内脂质蓄积[A];第七届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2009年

8 王少霞;李杨;杨蕾蕾;左红艳;刘肖;徐新萍;王德文;;极低频电磁场暴露对大鼠肺组织中巨噬细胞的影响[A];第十三届中国体视学与图像分析学术会议论文集[C];2013年

9 丁晨光;田普训;薛武军;郑瑾;段万里;赵艳龙;席敏;李杨;;Treg诱导巨噬细胞向M2型转化的作用研究[A];2013中国器官移植大会论文汇编[C];2013年

10 吕建新;金丽琴;袁谦;金晶;彭颖;李东;;巨噬细胞激活的标志物研究[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展（上册）[C];2001年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 通讯员 李静 记者 胡德荣;恶性肿瘤巨噬细胞未必皆“恶人”[N];健康报;2014年

2 兰克;以尝试用巨噬细胞治瘫痪[N];科技日报;2000年

3 薛佳;免疫系统——人体的“卫士”[N];保健时报;2009年

4 记者 胡德荣;铁泵蛋白“维稳”铁代谢作用首次阐明[N];健康报;2011年

5 侯嘉 何新乡;硒的神奇功能[N];中国食品质量报;2003年

6 唐颖 倪兵 陈代杰;巨噬细胞泡沫化抑制剂研究快步进行[N];中国医药报;2006年

7 刘元江;新发现解释肿瘤为何易成“漏网之鱼”[N];医药经济报;2007年

8 本报记者 侯嘉 通讯员 何新乡;今天你补硒了吗[N];医药经济报;2003年

9 左志刚;升血小板药使用注意[N];医药养生保健报;2007年

10 记者 许琦敏;“铁泵”蛋白帮助回收铁元素[N];文汇报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 戴菱菱;巨噬细胞的替代激活抑制脂毒性引起的巨噬细胞死亡[D];中南大学;2013年

2 马翠卿;GAS下调巨噬细胞炎症因子的作用及机制研究[D];河北医科大学;2011年

3 黄亚东;兔不同亚型单核/巨噬细胞与动脉粥样硬化发病关系的研究[D];中国协和医科大学;1991年

4 高飞;年龄相关性巨噬细胞极化对骨修复再生作用的研究[D];华中科技大学;2013年

5 刘灏;巨噬细胞再极化[D];重庆医科大学;2011年

6 刘芳;ABCG1基因表达对巨噬细胞功能影响及在动脉粥样硬化中作用的研究[D];北京协和医学院;2014年

7 周江睿;神经肽Y对巨噬细胞炎性因子和小分子炎症介质的调节及机制研究[D];第二军医大学;2012年

8 赵鲁杭;黄芪多糖的制备及其对巨噬细胞和树突状细胞免疫功能的影响[D];浙江大学;2011年

9 潘宇飞;信号调节蛋白α调节肿瘤相关巨噬细胞功能的作用与机制研究[D];第二军医大学;2013年

10 陆宁;巨噬细胞中表皮生长因子受体激活对细胞因子及实验性结肠炎的调节作用[D];天津医科大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 蒋璐;运动对大鼠巨噬细胞游离铁代谢的影响及机制探讨[D];江苏大学;2007年

2 朵瑞雪;免疫突触的形成对类风湿关节炎中巨噬细胞凋亡率影响的研究[D];第四军医大学;2011年

3 刘丹霞;结核杆菌对感染宿主巨噬细胞应激的调控作用及其机制研究[D];石河子大学;2013年

4 陈南鹏;肿瘤相关巨噬细胞的定量蛋白质组学研究[D];暨南大学;2011年

5 谢燕霞;芦笋多糖对巨噬细胞的免疫调节研究[D];山东师范大学;2008年

6 刘译聪;巴西天然蜂胶对牙龈卟啉单胞菌激活的巨噬细胞极化的调控及机制探讨[D];吉林大学;2014年

7 文明智;红霉素对香烟刺激的人巨噬细胞炎症介质的影响[D];广西医科大学;2010年

8 叶金善;环氧化酶-2/前列腺素E_2在血管紧张素Ⅱ刺激巨噬细胞表达细胞外基质金属蛋白酶诱导因子中的作用[D];第三军医大学;2010年

9 闫坤;前列腺素E1对小鼠子宫巨噬细胞表型和功能活性的影响[D];河南师范大学;2011年

10 汪韶君;扇贝裙边糖胺聚糖对巨噬细胞脂蛋白代谢及脂蛋白受体表达的影响研究[D];青岛大学;2006年

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