外界环境因素对细菌整合子捕获耐药性基因盒调控机制的研究

发布时间：2017-11-13 19:11

  本文关键词：外界环境因素对细菌整合子捕获耐药性基因盒调控机制的研究

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【摘要】：目的： 通过测定不同培养时间及不同培养温度下，大肠杆菌BL21(DE3)宿主中整合子的整合频率，研究环境因素对整合子捕获耐药性基因盒频率的影响，探讨整合子介导和传播细菌耐药性的调控机制，为临床合理有效使用抗生素，减少耐药菌株的产生和播散提供借鉴。 方法： 1.用pUC19为载体构建高表达整合酶的重组质粒pUCINT,随后在pACYC184载体的不同位置分别插入整合子以及氨基糖苷腺苷转移酶（aadA2）基因盒，该重组质粒命名为pACINAD,将这2种相容的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，将10株此菌株培养12h和24h后用实时荧光定量PCR反应测定发生整合作用的整合子的拷贝数和总的整合子的拷贝数，整合频率为前者与后者的比值。 2.将20株此菌株随机分成2组，，每组各10株，分别在41℃和37℃培养24h后测定大肠杆菌BL21(DE3)宿主中整合子的整合效率。 结果： 1.大肠杆菌BL21(DE3)宿主中整合子在12h时点整合效率的均值为5.51×10-5，在24h时点整合效率的均值为1.82×10-4。比较10株此菌株两个时点的整合效率，差异有统计学意义(t=5.165，P0.01)。 2.在41℃大肠杆菌BL21(DE3)宿主中所测得的重组效率为1.81×10-3，在37℃的重组效率为1.75×10-4。比较两者的重组效率，41℃组明显高于37℃组，差异具有统计学意义(t=9.266，P0.01)。 结论： 1.饥饿应激对整合子捕获耐药性基因盒频率有明显的提高作用. 2.高温可显著提高整合子对aadA2耐药性基因盒的整合效率。 3.表明不同的外界环境因素可影响整合子捕获基因盒的效率，研究环境因素对整合子捕获耐药性基因盒效率的影响，对于指导临床合理用药，以及可能开发出有效的药物或者采取一定措施来阻断这一过程以延缓耐药性基因的水平传播和多重耐药菌株的出现奠定基础。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R3416;R378

【参考文献】

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本文编号：1182003