糖类抗原50时间分辨荧光免疫试剂实验分析性能及临床性能评价研究

发布时间：2017-11-13 23:05

  本文关键词：糖类抗原50时间分辨荧光免疫试剂实验分析性能及临床性能评价研究

  更多相关文章： 糖类抗原50 时间分辨荧光免疫 肿瘤标记物

【摘要】：[研究背景及目的] 糖类抗原50(Carcinoma Antigen50, CA50)是一个主要用于消化道恶性肿瘤检测的肿瘤标记物。CA50在诊断恶性肿瘤时表现出较强的敏感性,所以在临床中广泛用于多种恶性肿瘤的筛查、辅助诊断、疗效评价、预后及复发判定,尤其是在消化道肿瘤中应用价值较大。但CA50特异性相对欠缺,对某一特定肿瘤的针对性不强,限制了CA50的临床应用,这也是大部分肿瘤标记物的通病,除了AFP、PSA等少数肿瘤标物,大部分肿瘤标记物的特异性都不太好。为了弥补CA50特异性低的缺陷,可以通过与其它肿瘤标记物联合检测、调整参考值等手段适当提高其特异性。总体来说,CA50的临床应用价值还是比较大。 时间分辨荧光免疫分析(Timed-resolved fluoroimmunoassay, TRFIA)是一种在临床上广泛应用的定量免疫检测技术。该技术采用具有独特荧光特性的镧系元素及其螯合物为示踪物。铕、铽等镧系元素发射的荧光具有以下特点：离子螯合物荧光衰变时间长；stokes位移大；发射光光谱狭窄。相对于酶联免疫、放射免疫,该技术具有灵敏度高、稳定性好、重复性好、无放射污染、标准曲线范围宽、应用范围广等优点；相对于国外进口化学发光免疫分析试剂又有价格便宜、通量高等优点。开发CA50时间分辨免疫检测试剂可以起到提高临床检测水平、进口替代及丰富检测仪器产品群的作用。 本研究旨在对团队开发出的CA50时间分辨免疫检测试剂进行实验室分析性能评价和临床性能评价,为申报临床体外诊断试剂注册提供依据。 [方法] (一)CA50时间分辨免疫检测试剂分析性能评价。分别对待考核CA50检测试剂的最低检出量、线性范围、HOOK效应、准确性、精密度、特异性、抗干扰能力、稳定性、参考范围等分析性能指标进行评价。 (二)CA50时间分辨免疫检测试剂分析性能评价。将在三家三级甲等医院用待考核试剂和参考试剂对临床标本进行盲法对照检测的数据进行统计学分析,对定性结果进行四格表卡方分析,计算敏感性、特异性、总符合率、kappa值等指标,评价符合隋况。对差异样本用待考核试剂和复核试剂进行复检,并进一步分析符合情况。对待考核试剂与参考试剂的检测结果进行定量分析,绘制散点图,分析相关系数、回归方程等指标以评价两者的相关性。绘制受试者工作特征曲线,计算曲线下面积,分析诊断率高低。 [结果] (一)CA50时间分辨免疫检测试剂分析性能评价结果。 待考核CA50试剂的最低检出量为0.37U/ml,准确性评价回收率为99.8%；线性范围为0-300U/ml,样品浓度超过1000U/ml开始出现HOOK效应,剂量反应曲线线性相关系数r为0.997；精密度评价中分析内、分析间精密度CV值均小于10%；特异性评价中待考核CA50试剂与AFP、CEA、CA153、CA125的交叉反应率小于0.1%,与CA199的交叉反应率为8.17%,表明CA199对检测结果有影响；抗干扰能力评价中分别加入高浓度的甘油三酯、胆红素、血红蛋白的标本检测回收率均在90-110%之间。 试剂盒储存于4℃冰箱中保存14个月之内,最低检出量检测值在0.16-0.41U/mL之间,国际标准品的回收率(准确度)在90.8-100.1%之间,线性相关系数(r)在0.9903-0.9998之间,精密性检测CV值在0.4-5.2%之间,各项指标均符合要求。当保存时间超过16个月时,准确度、精密度指标开始出现异常。 在37-C进行热破坏实验,3天和7天后的检测结果显示,最低检出量检测值在0.21-0.35U/mL之间,国际标准品的回收率(准确度)在94.6-102.4%之间,线性相关系数(r)在0.9930-0.9987之间；精密性检测分析内CV值在0.1-5.6%,分析间CV值在1.3-11%之间,各项指标均符合要求。 在参考值确定时,对479例健康人的血清标本进行检测,计算出95%可信区间为0-15.1U/ml,然后,从临床应用的角度,比较了95%可信区间参考值与大多数市面试剂所用参考值(0-25U/m1),确定最终的参考值为0-25U/ml。 (二)CA50时间分辨免疫检测试剂临床性能评价结果。 本次研究采用盲法对照实验,对纳入临床试验标准的1048例标本进行平行检测和统计分析,与参考方法(放免法)相比,本试剂盒的灵敏度为95.3%,特异度为97.4%,kappa值为0.924,总符合率为96.76%。对34例差异标本进行复核,有23例与复核试剂的检测结果一致,11例结果不一致。总体来说两种方法定性分析的符合率较高。从定量分析结果显示,与参考试剂的相关系数为0.804(P0.01),相关性较好。受试者工作特征曲线分析曲线下面积(ROC-AUC)为0.996(0.994-0.998,95%CI),P0.001,诊断价值较高。表明试剂盒准确可靠,具有较高的临床应用价值。 [结论] 上述结果表明本团队研制的CA50时间分辨免疫检测试剂的各项实验分析性能指标(准确性、灵敏度、精密性、剂量反应曲线的线性、特异性、抗干扰能力、稳定性等)均符合临床检测试剂要求,临床分析性能与已上市产品相仿,具有较高的临床应用价值。可以替代相应的放射免疫试剂／酶联免疫试剂,综合考虑性价比,还可以与市面上价格较高的进口化学发光试剂竞争。另外,CA199对CA50时间分辨免疫检测试剂检测结果有轻微干扰,建议CA50与CA199一同检测。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;Combined detection of serum tumor markers for differential diagnosis of solid lesions located at the pancreatic head[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2007年06期

，

本文编号：1182769