结核杆菌多抗原表位DNA疫苗对耐药结核病小鼠模型的疗效观察

发布时间：2017-11-16 21:00

  本文关键词：结核杆菌多抗原表位DNA疫苗对耐药结核病小鼠模型的疗效观察

  更多相关文章： 结核分枝杆菌 表位 DNA疫苗 免疫 疗效

【摘要】：目的研究由结核分枝杆菌抗原Hsp70，Ag85A和ESAT-6制成的多表位DNA疫苗的免疫效果及其联合结核化疗药物对耐药结核小鼠模型疗效。 方法实验选用健康纯系BALB/C小鼠，按不同的处理措施分为3组，每组30只：对照组1（A组），用不含疫苗的PBS溶液；对照组2（B组），用传统疫苗BCG免疫小鼠；实验组（C组），用多表位DNA疫苗免疫。A，B和C组分别在第1，3和5周分别用PBS溶液、BCG和多表位DNA疫苗免疫小鼠，每次每只小鼠接受的免疫剂量为0.3mL。在三次免疫结束后，于小鼠眼球采血,离心机分离血清，严格按照间接ELISA法测定结核特异性抗体IgG，用固相双抗体夹心ELISA法测定IL-2和IFN-γ。断颈处死小鼠，取出脾脏,分散脾细胞,洗涤并调整脾脏细胞密度,加入结核PPD抗原培养72h后，按照常规MTT法测定脾淋巴细胞增殖指数。将临床新分离的耐异烟肼和利福平的双重耐药结核菌株常规培养后，调整菌液浓度至1×104cfu，取0.2ml经小鼠尾静脉注射。注射4周后随机选5只小鼠，取其血液、肺脏和脾脏进行涂片、染色、显微镜观察，观察到结核菌者为感染小鼠。随机将感染小鼠模型分为对照组（D组），单纯结核化疗药物治疗组（E组）和化疗药物联合多表位DNA疫苗治疗组（F组），每组20只。D组不接受任何治疗措施；E组用利福平和异烟肼治疗；F组用利福平，异烟肼和结核多表位DNA疫苗联合治疗。药物给药方式为异烟肼0.03mg/(g·d)和利福平0.02mg/(g·d)灌胃，每日1次，连续10周；F组同时经肌肉注射多表位DNA疫苗，每2周1次，连续10周。于治疗结束时处死小鼠，称取小鼠体重，取小鼠肺、肝和脾称量并计算肺、肝、脾脏器指数。并取肺脏和脾脏研磨后用无菌肉汤培养基稀释100倍，取0.5mL接种于改良罗氏鸡卵平皿培养基上,37℃培养4周后进行菌落计数。用SPSS16.0统计软件分析数据，当P0.05为差异有统计学意义。 结果结核多表位DNA疫苗组的特异性IgG抗体，IL-2和IFN-γ水高于BCG组，差异有统计学意义(P＜0.05)；并且这两组均明显高于对照组1，差异有统计学意义(P＜0.05)；结核多表位DNA疫苗组的脾淋巴细胞增殖指数高于BCG组，差异有统计学意义(P＜0.05)，并且都高于对照组1(P＜0.05)。与对照组（D组）相比，单纯化疗对细菌培养菌落数无明显影响(P＞0.05)，而多表位DNA疫苗联合化疗治疗组菌落数明显比单纯化疗组和对照组（D组）低,(P＜0.05)。单纯化疗组的肺，，肝和脾脏器指数与对照组（D组）相比差异不大(P＞0.05)；而疫苗联合化疗治疗组的肺，肝脏和脾脏指数均明显低于单纯化疗组和对照组（D组）(P＜0.05)。 结论：由结核杆菌ESAT-6，Ag85A及Hsp70抗原构成的多表位DNA疫苗免疫小鼠能产生较强的抗结核免疫反应，可能通过刺激小鼠产生高水平的特异性IgG抗体、IL2和IFN-γ，和刺激特异性淋巴细胞增殖而加强耐药结核病小鼠综合治疗的疗效。
【学位授予单位】：延安大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392;R-332

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 郑建华;;白介素-2研究进展[J];海峡药学;2006年03期

2 ;Immunotherapy using IL-2 and GM-CSF is a potential treatment for multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis[J];Science China(Life Sciences);2012年09期

本文编号：1193627