人源抗TLR4抗体IgG的制备及其中和特性分析

发布时间：2017-11-20 00:29

  本文关键词：人源抗TLR4抗体IgG的制备及其中和特性分析

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【摘要】：目的 :构建全人源抗人Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)抗体轻、重链表达载体,在293Free style细胞中表达并纯化,分析该重组全分子抗体的生物学活性。方法:设计引物扩增全人源抗人TLR4抗体可变区编码序列,将其分别克隆到真核表达载体p FUSE-CHIg-h G1和p FUSE-CLIg-hl中,共转染至293Free style细胞,表达产物用protein A亲和层析柱纯化。应用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、Western blot、免疫共沉淀、质谱分析及蛋白芯片检测抗体的免疫学特性,并检测该抗体对人单核细胞淋巴瘤THP1细胞肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α表达的影响。结果:成功构建全人源抗人TLR4抗体真核表达载体,获得的全分子抗TLR4抗体保持了与抗原的结合活性,对THP-1细胞TNF-α表达的抑制率可达85.7%。结论:重组全人源抗TLR4 Ig G保持了与TLR4的结合特异性,并具有明显的中和作用,对炎症治疗具有潜在的应用价值。
【作者单位】： 南京医科大学病理系卫生部抗体技术重点实验室;中国人民解放军第八一医院全军肝病中心;南京军区军事医学研究所;
【基金】：国家新药创制项目资助(2013ZX09J13110-05B) 全军医学科学技术研究计划(08G023)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： [Acta Univ Med Nanjing,2015,35(06):777-781,786]Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)是Toll样受体家族的成员之一,是脂多糖(lipopolysacc-haride,LPS)的模式识别受体[1-2]。TLR4广泛表达在免疫细胞表面,其中既包括非特异免疫细胞如巨噬细胞、中性粒细胞和肥大细胞,又包

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本文编号：1205478