表达全人源抗人IgE单抗的候选细胞株鉴定及筛选

发布时间：2017-11-21 04:05

  本文关键词：表达全人源抗人IgE单抗的候选细胞株鉴定及筛选

  更多相关文章： 人免疫球蛋白E 全人源单克隆抗体 细胞株 鉴定

【摘要】：目的:鉴定及筛选表达原创性全人源抗人Ig E单克隆抗体的候选工程细胞株。方法:对实验室前期筛选到的Mab1#及Mab2#2个候选细胞株的3 L摇瓶流加培养12 d并经Protein A一步柱层析纯化的抗体样品,进行紫外光谱全波长扫描,采用LC-MS测定精确相对分子质量进行鉴别,采用SDS-PAGE(还原型及非还原型)进行分子完整性分析,采用SEC-HPLC进行集聚倾向性分析,采用IEF进行等电点(p I)测定及对N-糖苷酶(PNGase F)酶切前后样品的电荷进行比较分析,采用CEX-HPLC进行电荷异质性分析。同时,对Mab1#及Mab2#2个候选细胞株的3个月传代稳定性进行比较研究。结果:Mab1#及Mab2#2个候选细胞株表达抗体的紫外最大吸收波长均为280 nm;LC-MS轻链相对分子质量分别为23 464.82和23 465.06,重链(G0F糖型)相对分子质量分别为50 807.50 Da和50 807.48 Da,均与理论预期相符;SDS-PAGE(还原型及非还原型)电泳结果显示表达的抗体分子完整性好;SEC-HPLC聚集倾向分析显示2株单抗经一步Protein A亲和柱层析后的可溶性聚合体的含量均小于2%;IEF结果显示Mab1#和Mab2#p I分别为8.38和8.44,PNGase F酶切前后未见明显的由于糖基化修饰引起的电荷变异体。CEX-HPLC结果显示2株单抗的电荷均一性好,酸性变体及碱性变体含量之和均小于4%。完成的3个月细胞株稳定性研究结果显示Mab1#及Mab2#2株克隆均稳定。结论:Mab1#及Mab2#2个候选细胞株具有相似的目标抗体表达量、表达抗体的质量(分子完整性、聚集倾向、电荷异质性、亲和力)、以及细胞稳定性特征和细胞生长代谢特征等质量属性,均符合制定的阶段筛选目标。
【作者单位】： 武汉生物制品研究所有限责任公司抗体研究室;中国生物技术股份有限公司科研与国际合作部;
【分类号】：R392
【正文快照】： 目前全球尚无全人源抗人Ig E单抗进入临床阶段的开发或上市[1-2]。本实验室前期构建及筛选到2株表达原创性全人源抗人Ig E单抗的候选克隆Mab1#和Mab2#(另文发表),在40 m L摇瓶及3 L摇瓶流加培养中具有相似的细胞生长及代谢特征,目标抗体表达量接近0.5 g·L-1,亲和力分别为8.94

【参考文献】

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 钱卫珠;新型抗IgE人源化单克隆抗体的结构与功能研究[D];第二军医大学;2011年

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 张银川;刘萌萌;张雅婷;桂芳;张爱华;闭兰;潘勇兵;;表达全人源抗人IgE单抗的细胞株构建及筛选[J];中国生物工程杂志;2015年03期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 赵磊;基于药物临床试验计算机模拟技术（CTS）的二房室模型分析研究[D];云南大学;2013年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘志峰;郝理华;金玉;练敏;李玫;;儿童功能性胃肠病中IgE介导食物过敏原研究[J];南京医科大学学报(自然科学版);2013年01期

2 郭潮波,周彤;IgE与肿瘤[J];国外医学(免疫学分册);1987年02期

3 朱丽芳,吴雅玲;21例儿童咳嗽变异性哮喘过敏原皮试及IgE检测分析[J];中国厂矿医学;2002年01期

4 戴舜英,许以平,沈其昀,张海玲,荣盘根;酶联免疫吸附试验测定哮喘患者血清中特异性抗粉尘螨IgE的研究[J];上海免疫学杂志;1981年05期

5 李国光,贾义德,戴裕海,钱锋,朱桂宝,张惠娟;疫区人群血吸虫特异性抗体IgE动态变化及影响因素的研究[J];疾病控制杂志;1997年01期

6 李治;晁锦芙;罗夏;王桂荣;金贞爱;;某些皮肤病与IgE——附206例测定分析[J];内蒙古医学院学报;1986年02期

7 李霁;韩斐;王春辉;王波;;抽动障碍中医辨证治疗及其与IgE的关系[J];中国中医药信息杂志;2011年02期

8 赵建琴,俞红,李云珠,俞善昌;哮喘患儿血一氧化氮、可溶性白细胞介素2受体及IgE变化[J];实用儿科临床杂志;1997年03期

9 钱彦方,李炳文,李进让,尹国才,向景,李春凤;克鼻敏对变应性鼻炎症状体征及IgE的影响[J];北京中医药大学学报;1998年06期

10 周海峰,佘鸥,蒋重和;酸固定法显示单向免疫扩散中微量IgE的实验研究[J];上海免疫学杂志;1989年04期

中国重要会议论文全文数据库 前9条

1 张子文;;抗IgE治疗的发现和观念及其未来发展[A];中华医学会第二次全国变态反应学术会议论文汇编[C];2004年

2 张源;;小儿咳嗽变异性哮喘与哮喘抗原特异性IgE分析[A];中华医学会第七届全国哮喘学术会议暨中国哮喘联盟第三次大会论文汇编[C];2010年

3 崔天盆;王琳;胡丽华;吴健民;;活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶基因多态性与成人哮喘及IgE的相关性研究[A];第四届全国RNA进展研讨会论文集[C];2005年

4 彭志康;马雁冰;刘庆良;K．T．Hayglass;;抗IgE和抗白介素13的疫苗在治疗过敏性疾病中的研究[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年

5 李敏;杜琼;李兰;宋丽;李波;;四川地区支气管哮喘儿童IgE高亲合力受体β链基因多态性的初步研究[A];中华医学会第七次全国呼吸病学术会议暨学习班论文汇编[C];2006年

6 彭华;;慢性鼻窦炎患者过敏原IgE检查分析[A];中华医学会2011年全国变态反应学术会议论文集[C];2011年

7 刘美玲;;血清特异性抗体IgE与皮内试验方法对照研究[A];中华医学会2009年全国变态反应学术会议论文汇编[C];2009年

8 刘锦华;刘莉;高涛;蒋音;;病毒性肝炎合并高免疫球蛋白E(IgE)血症[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年

9 翁艳;;102例支原体感染患儿血嗜酸性粒细胞和IgE分析[A];2005年浙江省儿科学学术年会论文汇编[C];2005年

中国重要报纸全文数据库 前3条

1 武汉同济医学院 主任技师 金慰鄂;过敏反应的“主角”——IgE[N];家庭医生报;2003年

2 陶锦琰;美试验用抗体IGE治哮喘[N];中国医药报;2000年

3 辽宁医学院变态反应与临床免疫研究中心 长江学者 何韶衡 整理 刘洋;IgE阴性 还是过敏吗[N];健康报;2013年

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 钱卫珠;新型抗IgE人源化单克隆抗体的结构与功能研究[D];第二军医大学;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前5条

1 王富春;抗支糖浆对小儿咳嗽变异性哮喘肺功能和血清中IgE的影响和临床研究[D];黑龙江中医药大学;2010年

2 钟继聪;疏风清热利湿方对小儿原发性肾病综合征的疗效及IgE的影响[D];广州中医药大学;2009年

3 张玉梅;哮喘患儿血铅水平与IL-4、IgE的相关性分析[D];大连医科大学;2009年

4 高琳;抗IgE中和抗体表位筛选[D];第四军医大学;2005年

5 朱洪志;哮喘患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的变化及其与IL-18、IgE的相关性研究[D];中南大学;2014年

，

本文编号：1209592