Notch1在BMP9诱导iMEF细胞成骨分化中的作用

发布时间：2017-11-23 19:03

  本文关键词：Notch1在BMP9诱导iMEF细胞成骨分化中的作用

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【摘要】：目的研究Notch信号中Notch1受体在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导的永生化小鼠胚胎成纤维细胞(immortalized mouse embryonic fibroblasts,i MEF)成骨分化中的作用。方法利用Notch1受体显性负性突变体(dominant negative mutant,dn Notch1)处理i MEF细胞,首先分别采用细胞化学染色、活性测定和RT-PCR了解Notch1对早期成骨指标碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和晚期成骨指标骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的影响;其次用Western blot、荧光素酶和RT-PCR检测Notch1对BMP9经典信号通路中Smad1/5/8磷酸化和Smad结合元件(smad-binding element,SBE)活性影响;最后用结晶紫染色和流式细胞仪分析其对细胞增殖、周期及凋亡的影响。结果与对照组相比,dn Notch1处理i MEF第3、5、7天后,ALP活性均降低(P0.05),并呈剂量依赖性,11 d时OPN和OCN表达量也下调(P0.05);BMP9经典通路中Smad1/5/8蛋白量没有明显变化,而p-Smad1/5/8蛋白及SBE活性受到了抑制(P0.05);结晶紫染色及流式细胞仪分析结果显示dn Notch1能够抑制BMP9诱导的i MEF早期细胞增殖,但对细胞凋亡无影响。结论 dn Notch1竞争抑制Notch1信号,使BMP9诱导i MEF的成骨分化能力显著下降,其可能通过抑制BMP信号通路的活化和i MEF早期增殖两方面来实现。
【作者单位】： 重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室;
【基金】：重庆市自然科学基金(CSTC2012jj A10004) 重庆市教委科学技术研究项目(KJ130305)~~
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一种具有很强自我更新能力和多向分化潜能的干细胞,在一定的诱导条件下,其可向成骨、成肌、成脂等多种细胞分化[1-2],因此,在再生医学领域,MSCs一直被作为理想种子细胞用于多种组织的修复[3],也被用于骨质疏松、难治性骨折等

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本文编号：1219477