诺如病毒GⅡ.4型Hunter504D株P粒子的表达，表征及免疫原性研究

发布时间：2017-11-25 15:27

  本文关键词：诺如病毒GⅡ.4型Hunter504D株P粒子的表达，表征及免疫原性研究

  更多相关文章： 诺如病毒GⅡ.4型 Hunrer株 P粒子 组织血型抗原 中和抗体检测

【摘要】：诺如病毒（norovirus,NoV）是最常见的引起病毒性胃肠炎的病原，已有报道，十一月至三月之间是北半球的暴发高峰期。在过去的十年，NoV在全球性范围暴发的次数在不断增加，尤其是由GII基因组4基因型（GII.4）变异株引起的暴发。在世界范围内，NoV可以感染所有年龄的人。疾病预防控制中心估计，美国平均每年食物性感染病例中至少有2300万例是因NoV感染引起的。而且在监视欧洲食物性感染的网络数据表明，在1995-2000年之间暴发的病毒性胃肠炎可能是由这些病毒引起的。 病毒引起的疾病通常是自身限制的，症状包括急性的呕吐和腹泻，在一至三天之内症状会缓解。对NoV进行相关性研究的原因在于其在人群中有较高的患病率，尤其在老年人和免疫抑制患者中较为严重，延长发病时间。NoV暴发可能影响数百人，众所周知，NoV暴发很难被控制，并且主要发生在人们紧密接触的地方，例如医院，长期看护中心。由于抗人类NoV的疫苗尚在研究中，，减少NoV感染的预防措施包括洗手，摄入安全的水和食物，远离被污染的物质以避免疾病传播。 人类NoV不能在细胞中有效的培养或感染小动物，因此，亚单位疫苗对NoV来说是一个选择。NoV衣壳蛋白在昆虫细胞中通过重组杆状病毒或其他的真核表达系统中表达后自发的组装成VLP，然而在原核表达系统中不能成功产生VLP。另一种类型的NoV亚病毒颗粒P粒子有可能成为第二代NoV疫苗。P粒子由P结构域形成并与VLP有相同的抗原表位。P粒子具有很高的免疫原性并且非常稳定，最重要的是，P粒子可以在大肠杆菌中高效的表达。 GII.4型NoV及其变异株一直是全球的流行株，存在持续感染。近几年来，GII.4型NoV一直是引起我国NoV暴发的主要流行株。本实验选择2004-2006年间暴发流行的Hunter株P结构域进行研究，希望能获得在原核表达系统高效表达的P蛋白。通过对P蛋白的研究，为NoV亚单位疫苗研制提供理论基础。 本研究中以合成GII.4型Hunter株ORF2序列为模板，进行PCR反应并扩增出P结构域，克隆到表达载体pET28a(+)，构建原核表达质粒(pET28a-P Particle)，在大肠杆菌BL21中表达P蛋白。为了检测重组蛋白的分子量大小，重组蛋白经SDS-PAGE凝胶分离。分析表达产物显示P结构域编码一个分子量大小约为35KD的蛋白。P蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化、分子筛分离、电镜检测发现，当P结构域在大肠杆菌中表达后，形成不同的P粒子。我们之后研究P粒子在Balb/c小鼠和新西兰大白兔体内的免疫反应，用P蛋白做抗原通过ELISA方法检测血清中NoV的抗体，并且通过血清对P粒子与组织血型抗原（HBGA）之间作用的阻断检测血清中NoV抗体的中和活性。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392.1

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 王大鹏;吴清平;寇晓霞;;诺瓦克病毒研究进展[J];微生物学报;2007年05期

2 李晓波;付瑞;王吉;卫礼;王淑菁;岳秉飞;贺争鸣;;鼠诺如病毒分离株全基因组序列的测定及分析[J];中国病毒病杂志;2013年05期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 薛亮;吴清平;;诺如病毒分子进化研究进展[A];2010第二届中国食品安全高峰论坛论文集[C];2010年

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 薛亮;诺如病毒GⅡ型流行株基因组特征分析及进化机制研究[D];华南理工大学;2013年

本文编号：1226508