转染CX3CR1基因对小鼠骨髓间充质干细胞向Fractalkine趋化能力的影响

发布时间：2017-11-25 22:03

  本文关键词：转染CX3CR1基因对小鼠骨髓间充质干细胞向Fractalkine趋化能力的影响

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【摘要】：目的:研究在Transwell共培养体系中,转染CX3CR1基因对小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向趋化因子Fractalkine(FKN)趋化能力的影响。方法:采用差速贴壁法分离纯化小鼠MSCs,体外培养、传代扩增,流式细胞术检测细胞表面抗原标志和细胞周期;将携带有趋化因子受体CX3CR1基因及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的慢病毒(LV-CX3CR1-EGFP)及空载体病毒(LV-CON-EGFP)转染小鼠MSCs细胞,RT-PCR法分别检测空白对照组、实验组、阴性对照组细胞中CX3CR1 mRNA表达情况,Western blot印记法检测CX3CR1蛋白的表达水平,并通过Transwell共培养体系观察不同转染组细胞向趋化因子FKN的迁移情况。结果:成功获得了细胞形态均一,生长状态良好的MSCs;细胞CD29、CD44、CD34有阳性表达;阴性对照组和空白对照组小鼠MSCs不表达CX3CR1基因;构建的慢病毒过表达载体pUbi-MSC-CX3CR1-EGFP能成功转染至小鼠MSCs中,并使转染后的MSCs表达CX3CR1 mRNA及蛋白。在Transwell共培养体系中,转染CX3CR1基因的小鼠MSCs向趋化因子FKN趋化能力明显强于各对照组(P=0.000),其中阴性对照组浸润至下室的细胞数为:(13.80±2.17)个每高倍镜视野(n=5)。实验组浸润至下室的细胞数为:(35.80±3.34)个每高倍镜视野(n=5)。FKN抗体阻断组浸润至下室的细胞数为(14.80±1.92)个每高倍镜视野(n=5)。结论:转染CX3CR1基因能有效增加小鼠MSCs向趋化因子FKN趋化的能力。
【作者单位】： 重庆医科大学附属第一医院老年科;
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心血管系统疾病中常见的疾病,也是危害人类健康的疾病,其发病机制和治疗方法的研究一直是心血管疾病研究领域的热点。血管内皮损伤及炎症反应是AS发生发展的中心环节,因此保护血管内皮功能和抑制炎症反应在AS的治疗中显得尤为重要。在AS病

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本文编号：1227510