分枝杆菌噬菌体Chy2生物扩增法的建立及其检测效果的评价

发布时间：2017-11-26 07:31

  本文关键词：分枝杆菌噬菌体Chy2生物扩增法的建立及其检测效果的评价

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【摘要】：目的 结核病是严重危害人类健康的公共传染性疾病，具有高感染率、高患病率和高病死率的特点。早期发现、快速诊断结核病，从而及时给予有效的药物治疗是减少结核病传播机会，控制疫情蔓延的重要手段。噬菌体生物扩增法是用分枝杆菌噬菌体D29快速检测结核分枝杆菌活菌建立的病原学表型检测技术。该方法成本低、操作简易、检测特异性高、48小时即可报告结果，具有广阔的开发空间和巨大的应用潜能，尤其适合在结核病高负担、经济水平相对滞后的发展中国家和地区推广使用。然而，噬菌体生物扩增法最大的缺陷是检测灵敏度低，成为遏制该技术推广应用的瓶颈。 本课题组在国家“十一五”重大科技专项课题的前期研究中，自我院结核病房的花盆泥土发现１株分枝杆菌噬菌体，经分离、纯化，对其生物学特性、遗传背景、全基因组序列进行全面分析，证明是一种新结核分枝杆菌噬菌体，命名为Chy2。本研究针对噬菌体生物扩增法的关键技术环节，探索Chy2应用于生物扩增法的技术条件，拟建立噬菌体Chy2生物扩增法（Chy2-PhaB）；初步探讨Chy2-PhaB对结核分枝杆菌的检测效果，为进一步发掘噬菌体Chy2的临床应用价值，优化噬菌体生物扩增法检测技术、提升其检测效能提供科学理论基础。 方法 1、液体培养法培养耻垢分枝杆菌，罗氏培养基培养结核分枝杆菌标准株，菌落计数法测定细菌浓度，双层平板培养法扩增噬菌体，小平板法测定噬菌体滴度。 2、噬菌斑点测法观察噬菌体杀灭剂灭活噬菌体Chy2的最低浓度和最短时间，确定其作用时间和工作浓度。 3、噬菌斑计数法确定Chy2与结核分枝杆菌孵育达到最高感染率的感染时间和感染滴度。 4、收集并处理58份临床痰液标本，分别用噬菌体Chy2和D29生物扩增法检测痰液标本中的结核分枝杆菌，同时以改良罗氏培养法作诊断标准，对比评价两种噬菌体生物扩增法的检测效能。 结果 1、经培养后，耻垢分枝杆菌浓度为4.5×10~9CFU/ml，结核分枝杆菌浓度为3×10~8CFU/ml；经扩增后，Chy2滴度为2.2×10~(11)PFU/ml，D29滴度为1.9×10~(11)PFU/ml。 2、最低6%硫酸亚铁铵溶液与Chy2作用最短5min可彻底灭活宿主菌体外的游离Chy2。 3、Chy2滴度为2.2×10~(11)CFU/mL，与结核分枝杆菌孵育240min，感染效率最高。 4、Chy2-PhaB对痰标本中结核分枝杆菌的检测灵敏度、特异性、Youden指数、阳性预测值和阴性预测值分别为94.7%、85.0%、0.797、0.923、0.895，，D29-PhaB的检测结果相应为76.3%、95.0%、0.713、0.967、0.678。 结论 1、明确Chy2应用于噬菌体生物扩增法的技术条件，成功建立了噬菌体Chy2生物扩增法。 2、噬菌体Chy2生物扩增法的灵敏度、阴性预测值显著优于噬菌体D29生物扩增法。 3、Chy2-PhaB和D29-PhaB的检测特异性、Youden指数、阳性预测值相似。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R378.911;R446

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本文编号：1229062