结核分枝杆菌特异性抗原ESAT6的串联表达及其免疫原性研究

发布时间：2017-11-27 07:11

  本文关键词：结核分枝杆菌特异性抗原ESAT6的串联表达及其免疫原性研究

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【摘要】：目的表达并纯化ESAT6c2融合蛋白,并对融合蛋白免疫原性进行鉴定,以用作结核菌特异性IFN-γElispot试剂盒的特异性抗原。方法全基因合成ESAT6目的基因,利用Bam HⅠ和BglⅡ同尾酶串联目的基因,构建ESAT6c2-p ET25b重组质粒,转化E.coli,诱导表达。Ni柱亲和纯化融合蛋白,测定浓度后应用到T.SPOT-TB试剂盒(Oxford)检测临床样本进行免疫原性研究。结果成功构建了ESAT6串联表达重组质粒,制备出高纯度的ESAT6c2融合蛋白。临床样本检测结果表明ESAT6c2融合蛋白作为刺激源,与临床诊断相比特异性为100%(20/20),灵敏度为84.61%(33/39);与T.SPOT-TB试剂盒TA检测孔有较强一致性(Kappa=0.932)。稳定性研究也表明,ESAT6c2融合蛋白经加速破坏试验后,与临床诊断相比特异性为100%(20/20),灵敏度为84.38%(27/32);依然与TA检测孔有较强一致性(Kappa=0.923)。结论 获得的高纯度ESAT6c2融合蛋白,可以应用于结核菌特异性IFN-γElispot试剂盒。
【作者单位】： 郑州人福博赛生物有限责任公司;郑州市第七人民医院内分泌科;郑州市第六人民医院检验科;郑州大学生命科学学院;
【基金】：郑州产学研项目(0911SCXY00542)
【分类号】：R392
【正文快照】： 结核病是由结核分枝杆菌感染所致的一种慢性传染病,其中以肺结核最为常见,呈世界性分布。目前结核病仍旧是人类所面临的最严重的传染病之一,早诊断、早治疗在结核病的防控中有着重要意义。近年来,基于结核分枝杆菌特异性抗原的γ-干扰素释放试验(interferon gamma release ass

【参考文献】

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本文编号：1231009