金黄色葡萄球菌EsxA基因的克隆及表达

发布时间：2017-11-27 17:01

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【摘要】：目的在原核质粒中克隆金黄色葡萄球菌(S.aureus)Esx A基因,并进行表达及纯化,为其功能研究奠定基础。方法根据Gene Bank中S.aureus Esx A序列,设计特异性引物PCR扩增Esx A基因,PCR产物纯化后经Eco RΙ和XhoΙ双酶切,连接至p ET-28a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,His柱纯化重组Esx A蛋白,SDS-PAGE和Western blot验证重组蛋白的表达。结果成功克隆Esx A基因,基因全长294 bp,起始于ATG,终止于TAA,预测的分子量为11 036.2,等电点为4.61,经双酶切在294 bp处可见目的条带,基因测序显示Esx A在正确阅读框内,提示重组蛋白构建成功。SDS-PAGE显示重组蛋白在分子量大约14.5×103 Mr处左右见到可溶性的蛋白表达,Western blot分析识别14.5×103 Mr重组蛋白。结论在大肠杆菌中成功克隆表达Esx A蛋白,为其功能研究奠定基础。
【作者单位】： 广州医科大学;广州市妇女儿童医疗中心检验科;
【基金】：广州市医药科技重点项目(201102A212013)
【分类号】：R378
【正文快照】： 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是人类化脓性感染中最常见的病原菌,可引起局部化脓感染,肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等,甚至败血症、脓毒症等全身感染[1]。近年来金黄色葡萄球菌的感染率上升,尤其随着耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylo

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本文编号：1232534